脓毒症大鼠外周血单核细胞TLR4表达变化及TGF-β1干预作用的研究

论文摘要

目的:脓毒症病情发展迅速,病死率高,尚缺乏针对性的治疗手段,是当前危重病医学面临的难题。目前已证实TLR4在LPS跨膜信号转导中的重要作用。TGF-β作为免疫抑制因子,参与调节脓毒症,但其作用效应尚有争议,作用机制仍未完全清楚。本实验通过盲肠结扎穿孔法复制大鼠脓毒症模型,动态观察脓毒症不同时间点外周血有核细胞表面TLR4的表达变化并研究TGF-β1对外周血单核细胞表面TLR4及外周血TNF-α水平的调节作用,探讨TGF-β1调节脓毒症炎症反应的作用及可能机制。方法:1、动物分组:清洁级健康雄性SD大鼠120只,体重220-250克,随机分为对照组40只（随机分5组,每组8只）、脓毒症模型组及TGF-β1干预组各40只（各组随机分5组,分别为2h组、6h组、12h组、24h组、48h组,每组8只）。2、以盲肠结扎穿孔法（cecal ligation puncture,CLP）建立脓毒症模型,于造模后腹腔补充林格氏液5ml。脓毒症模型组于造模后0.5小时尾静脉注射生理盐水1ml,TGF-β1干预组于造模后0.5小时尾静脉注射TGF-β1（20ng/ml·250g）。3、采用流式细胞术检测各组有核细胞表面TLR4表达变化、ELISA法检测各组血清中TNF-α浓度变化,采血后活杀大鼠,留取肺脏、肾脏组织制备HE病理切片观察组织形态学改变。4、数据结果应用SPSS11.5统计软件进行分析,P< 0.05为差异有统计学意义。结果:①TLR4在脓毒症大鼠外周血单核细胞表面表达高于相同时间点中性粒细胞表面表达,差异在2h、12h、24h、48h均有统计学意义（P<0.05）;高于相同时间点淋巴细胞表面表达,差异在24h、48h均有统计学意义（P<0.05）。②CLP术后2-12 h TLR4在外周血单核细胞表面表达逐渐下降,12 h降至最低,此后表达升高;CLP术后6-12h TLR4在外周血单核细胞表面表达明显低于对照组（P<0.05）;TGF-β1干预组TLR4在单核细胞表达较脓毒症模型组表达降低,在CLP造模后2h、24h、48h差异均有统计学意义（P<0.05）。③CLP术后2-48h外周血TNF-α浓度水平较对照组明显升高,差异在CLP术后2h、6h、12h、24h、48h均有统计学意义（P<0.05）,TNF-α浓度水平在CLP术后2h即达高峰,随后表达下降,于CLP术后12h再次高峰表达,此后表达逐渐下降;TGF-β1干预组外周血TNF-α浓度较脓毒症模型组明显升高,差异在2h、6h、12h、24h、48h均有统计学意义（P<0.05）。④相关性分析显示在TGF-β1干预组血清TNF-α浓度水平与单核细胞表达TLR4阳性率程度不相关（r=0.127, P >0.05）。⑤CLP术后24h-48h,肾脏及肺脏组织形态学改变最明显。在脓毒症模型组CLP术后24小时大鼠肾脏病理可见肾小球部分萎缩或消失,有的与肾小囊呈不同程度粘连;肾小管细胞萎缩、消失;肾间质淋巴细胞浸润明显,还可见部分中性粒细胞、单核细胞浸润。在TGF-β1干预组可见肾小球坏死明显,小球萎缩或消失,与肾小囊呈不同程度粘连;肾小管细胞萎缩、消失;肾间质淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞浸润浸润明显,较CLP模型组炎症浸润加剧。在脓毒症模型组CLP术后24小时肺脏组织病理可见Ⅰ型、Ⅱ型肺泡上皮细胞形态改变,肺泡结构部分破坏,肺泡间隔部分破坏,肺泡间隔及肺泡腔内可见炎症细胞浸润,肺泡腔可见少量炎性渗出物。在TGF-β1干预组可见Ⅰ型、Ⅱ型肺泡上皮细胞形态改变,肺泡结构明显破坏,肺泡间隔明显破坏,肺泡间隔及肺泡腔内大量炎症细胞浸润,肺泡腔内充满炎性渗出物,较CLP模型组炎症浸润加剧。结论:①TLR4主要表达在脓毒症大鼠外周血单核细胞表面;②外周血单核细胞TLR4表达下降主要发生在脓毒症后12-24小时内;③TGF-β1能调节TLR4在外周血单核细胞上的表达变化,能促进脓毒症前炎症因子TNF-α生成,加剧组织器官炎症损伤,但TGF-β1调节TNF-α的产生增加不是通过调节外周血单核细胞上TLR4表达变化实现的。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• （九） 附图
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢