雷公藤甲素对PC-3细胞裸鼠移植瘤模型的实验研究

论文摘要

前列腺癌（PCa）是男性最高发的恶性肿瘤之一。发病率不但随年龄的增长而增加,而且还存在着明显的地区差异性,在欧美国家前列腺癌是仅次于肺癌的男性的第二大杀手;我国原本是低发区,但由于生活方式西化,蛋白质和脂肪等摄入量增加,近年来发病率不断增加,这将严重影响我国男性的身体健康。目前,临床治疗前列腺癌的主要方法有:化学疗法、放射疗法、手术疗法、内分泌疗法等。由于前列腺癌在我国未受到高度重视以及诊断的不及时,从而导致发现的前列腺癌患者多数为中晚期,而现有的手段不能完全达到治疗的效果。因此,研发新的治疗前列腺癌的药物或寻找新的治疗方案是目前的当务之急。本实验室已经通过MTT法,凋亡检测等方法证明雷公藤甲素可以体外抑制前列腺癌的增殖,提示雷公藤甲素可能是一个很好的治疗前列腺癌的药物,为了进一步研究其抗癌活性,本实验通过构建前列腺癌裸鼠模型来检测雷公藤甲素的体内抗前列腺癌活性。首先,本实验是把体外培养的PC-3细胞注射到裸鼠背部皮下,成功构建了前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,待实体瘤长到100mm3左右时,将成瘤鼠随机分成两组:即阴性对照组和0.4 mg/kg/d的雷公藤甲素处理组。处理组的裸鼠通过皮下注射0.4 mg/kg/d的雷公藤甲素15天,对照组的裸鼠则是用含有等量DMSO的生理盐水代替。实验结果表明, 0.4 mg/kg/d的雷公藤甲素能够显著抑制实体瘤的体积和重量的增长,但对裸鼠的体重没有影响,毒副作用也很小,毛色、皮肤颜色均正常。其次,用HE染色观察肝、肾等脏器及肿瘤组织的病理变化,其结果发现药物处理后肝、肾组织结构并没有明显地变化,说明肿瘤并没有发生转移、雷公藤甲素对裸鼠的脏器没有产生毒副作用;而肿瘤组织存在很大的差异:与对照组相比较,雷公藤甲素处理组肿瘤细胞细胞质弥散,细胞核大深染并且细胞核的数量较少,还有坏死现象。最后,用免疫荧光和免疫组化观察肿瘤组织中SENP1的表达变化,染色结果均显示对照组中SENP1的表达水平明显高于雷公藤甲素处理组的,说明雷公藤甲素可以抑制SENP1的表达,提示,雷公藤甲素治疗前列腺癌的机理可能与SENP1的表达是相关的。综上所述,雷公藤甲素在体内外都可以显著抑制前列腺癌的增长,并且可以下调前列腺癌中SENP1蛋白的表达水平,说明雷公藤甲素可能是一个很好的治疗前列腺癌的新药物。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 前列腺癌的发病机理及分子机制
• 1.1.1 前列腺癌的发病机理
• 1.1.2 前列腺癌发生的分子机制
• 1.2 前列腺癌治疗进展
• 1.3 前列腺癌鼠模型研究进展
• 1.3.1 自发和诱发鼠模型
• 1.3.2 异种移植鼠模型
• 1.3.2.1 原位肿瘤模型
• 1.3.2.2 皮下移植瘤模型
• 1.3.3 前列腺癌基因敲除鼠模型
• 1.3.3.1 Cre/LoxP 重组系统
• 1.3.3.2 Cre/LoxP 系统介导的鼠 PTEN 肿瘤抑制基因的失活
• 1.4 天然小分子化合物雷公藤甲素
• 1.5 本研究的目的和意义
• 1.6 实验技术路线
• 第二章 实验方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 实验动物、细胞
• 2.1.4 试剂配制
• 2.1.4.1 细胞培养所用试剂
• 2.1.4.2 BALB/c 裸鼠处理所用试剂
• 2.1.4.3 HE 染色所用试剂
• 2.1.4.4 免疫荧光所用试剂
• 2.2 主要实验方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 模型构建及药物处理
• 2.2.2.1 构建 BALB/c 裸鼠皮下抑制瘤模型
• 2.2.2.2 分组及给药
• 2.2.3 肿瘤组织以及相关器官的HE 染色
• 2.2.4 肿瘤组织中SENP1 的免疫荧光染色
• 2.2.5 肿瘤组织中SENP1 的免疫组化染色
• 第三章 实验结果
• 3.1 成功构建了前列腺癌肿瘤模型
• 3.2 雷公藤甲素体内抑制前列腺癌的生长
• 3.2.1 雷公藤甲素抑制前列腺癌实体瘤体积的增长
• 3.2.2 雷公藤甲素抑制前列腺癌实体瘤重量的增长
• 3.3 肿瘤组织病理检测及 SENP1 的表达
• 3.3.1 肿瘤组织 HE（苏木精-伊红）染色
• 3.3.2 肿瘤组织中SENP1 的表达变化
• 3.4 雷公藤甲素的毒性检测
• 3.4.1 雷公藤甲素对裸鼠体重的影响
• 3.4.2 雷公藤甲素对裸鼠脏器（肝、肾）的影响
• 第四章 讨论与展望
• 4.1 雷公藤甲素对人前列腺癌细胞PC-3 裸鼠实体瘤的影响
• 4.2 SENP1 的作用机理，及在前列腺癌中的表达
• 参考文献
• 缩略语表
• 致谢
• 作者简介