蜜蜂和家蚕烟碱型乙酰胆碱受体亚基基因a6和钾离子通道亚基基因shaker的克隆和序列分析

论文摘要

真核生物RNA的成熟通常需要经历复杂的转录后加工过程，其中包括修饰、异构、附加、编辑和剪接等。A至I RNA编辑是由作用于RNA的腺嘌呤脱氨酶（ADARs）介导的。ADAR是一种RNA编辑酶，它作用于双链RNA（dsRNA）上的腺嘌呤（A）并使之脱氨转变为次黄嘌呤（I）。次黄嘌呤翻译过程中通常被识别成鸟嘌呤。本论文在前人对果蝇、蚊子烟碱型乙酰胆碱受体亚基α6有关编辑位点和选择性剪接方式研究的基础上，克隆蜜蜂、家蚕α6基因部分序列并进行序列分析和表达检测。通过对含有编辑位点的果蝇编码区和外显子的BLAST，根据与蜜蜂和家蚕基因组的同源性设计特异引物。提取蜜蜂和家蚕四个发育阶段的总RNA，包括卵、幼虫、蛹和成虫，并从成虫中提取基因组DNA。进行RT-PCR后，通过PCR产物直接测序和克隆后测序，比对cDNA和基因组DNA扩增产物的测序结果，在蜜蜂α6的外显子5中发现8个编辑位点，家蚕α6的外显子5中发现5个；同时发现蜜蜂α6含有三种外显子8序列，并且还发现RNA的A至I编辑和选择性剪接存在着某些内在联系。通过九种昆虫氨基酸同源性的比较及分子系统进化树的构建说明，α6的进化较保守。离子通道是神经、肌肉和其它组织细胞膜兴奋性的基础，是生物电活动的基础，乙酰胆碱受体属于配体门控型离子通道。对烟碱型乙酰胆碱受体亚基α6的研究将有助于进一步阐释遗传信息的空间传递模式及其介导的基因表达调控模式。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语
• 第一部分 文献综述与实验设计方案
• 第一章 RNA的转录后加工
• 1.1 已发现的主要RNA编辑方式
• 1.1.1.锥虫线粒体RNA多个U的添加和去除
• 1.1.2.C至U RNA编辑
• 1.1.3.高等生物中的A至I RNA编辑
• 1.2 多种选择性剪接方式
• 1.3 RNA编辑与选择性剪接的相互作用
• 第二章 离子通道
• 2.1 离子通道类型
• 2.1.1.配体门控离子通道
• 2.1.2.电压门控型离子通道
• 2.1.3.其它通道类型
• 2.2 离子通道中的RNA编辑
• 2.2.1.AMPA型谷氨酸受体中的RNA编辑
• 2.2.2.烟碱型乙酰胆碱受体中的编辑
• 2.3 展望
• 第三章 实验设计与方案
• 3.1 本实验的目的和意义
• 3.2 本研究的主要内容
• 3.2.1.蜜蜂和家蚕A至I mRNA编辑位点的发现及特性分析
• 3.2.2.A至I mRNA编辑和选择性剪接的生物学功能研究
• 3.3 实验流程图
• 第二部分 研究内容
• 第四章 α6A至I RNA编辑及选择性剪接
• 4.1 材料与试剂
• 4.2 模板制备
• 4.2.1.方法
• 4.2.2.结果与分析
• 4.3 α6的编辑位点
• 4.3.1.方法
• 4.3.2.结果与分析
• 4.4 蜜蜂α6第八个外显子的选择性剪接分析
• 4.4.1.方法
• 4.4.2.结果与分析
• 4.5 蜜蜂α6在不同发育阶段的表达量检测
• 4.5.1.方法
• 4.5.2.结果与分析
• 第五章 shaker A至I RNA编辑
• 5.1 材料试剂与准备
• 5.2 蜜蜂和家蚕shaker的编辑位点
• 5.2.1.方法
• 5.2.2.结果与分析
• 结论
• 参考文献
• 致谢