论文摘要
目的:脓毒症（sepsis）是由感染因素介导的全身性炎症反应综合征（Systemic inflammatory response syndrome,SIRS）,是严重创伤、外科大手术后常见的并发症,由脓毒症进展所导致的休克和多器官功能障碍综合征（mutiple organ dysfunction syndrome, MODS）是导致临床危重患者死亡的重要原因,其病死率高达50%-60%,至今尚无可靠有效的治疗手段。因此寻找防治脓毒症的药物具有重要意义。盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture, CLP）模型是经典的脓毒症模型。本研究拟在对啮齿类CLP模型动物进行相关研究的基础上,探讨青蒿琥酯对啮齿类CLP模型动物的保护作用及机制,为脓毒症的防治和扩大青蒿琥酯类药物的临床适应症提供实验依据。方法:一、啮齿类动物CLP模型的建立:采用不同型号的穿刺针及对盲肠做不同的穿孔数量制作CLP动物模型,观察CLP动物7d的存活情况。二、青蒿琥酯对啮齿类CLP模型动物的保护作用:CLP术后肌注给药和尾静脉给药,观察7d。三、青蒿琥酯单用和联合舒氨西林对啮齿类CLP模型动物的保护作用。四、青蒿琥酯对啮齿类CLP模型动物保护作用的机制研究:1.动态观察青蒿琥酯对CLP模型小鼠血中细菌、LPS、TNF-α和IL-6水平的影响;2.观察CLP模型小鼠术后12 h肺组织病理学的变化。结果:一、控制动物死亡率在90%左右的CLP模型制作条件为:大鼠用16号穿刺针穿孔2次;小鼠用12号穿刺针穿孔2次。二、青蒿琥酯对啮齿类CLP模型动物的保护作用:在大鼠保护实验中青蒿琥酯联合舒氨西林用药动物存活率为48%,舒氨西林组为24%,青蒿琥酯组为28%;在小鼠保护实验中联合用药组存活率为40%,舒氨西林组为20%,青蒿琥酯组为28%。联合用药组动物存活率均高于单独用药组,具有显著的统计学差异。三、青蒿琥酯对啮齿类CLP模型动物保护作用的机制研究:1.青蒿琥酯联合舒氨西林对CLP模型动物血清LPS的影响:CLP术后0.5 h对照组动物血中即可检出LPS,其检出值在0.5 - 2 h缓慢升高,2 h后急剧上升,在12 h达峰值,以后逐渐下降;联合用药组LPS的检出规律与对照组相似,但在各时相点的检出值均低于对照组,在24 h时具有显著统计学差异。2.青蒿琥酯联合舒氨西林对CLP模型动物血清TNF-α的影响:CLP术后0.5 h对照组动物血中即可检出TNF-α,其检出量在0.5 - 8 h缓慢升高,8 h后急剧上升,在12 h达峰值,以后逐渐下降。联合用药组动物在术后1 h左右血中TNF-α开始升高,8 h以后逐渐下降,无明显峰值形成,其检出值在各时相点均低于对照组,在2 h、4 h、8 h、12 h时相点具有显著统计学差异。3.青蒿琥酯联合舒氨西林对CLP模型动物血清IL-6的影响:CLP术后0.5 h对照组动物血中即可检出IL-6,其检出量在0.5 - 1 h缓慢升高,1 h后急剧上升,在2 -12 h间形成一平台峰,12 h后迅速下降,在24 h接近1 h水平;其它各组动物血清IL-6的检出规律与对照组相似。联合用药组动物血清IL-6的检出值在各时相点均低于对照组动物,在2 h、4 h、12 h时相点具有显著统计学差异。4.青蒿琥酯联合舒氨西林对CLP模型动物血中细菌检出的影响:CLP术后0.5 h对照组动物血中即可检出细菌,其检出的菌量在0.5 - 2 h缓慢升高,2 h后急剧上升,在8-12h达峰值,以后逐渐下降;联合用药组动物在术后1- 12 h血中检出细菌,在1-12 h期间血中检出的细菌无峰值形成,其细菌的检出值在各时相点均显著低于对照组和青蒿琥酯组,在12 h、24 h血中检出细菌明显低于舒氨西林组。5.肺组织病理检测: CLP术后动物肺组织损伤严重,表现为不同程度的肺泡扩张,肺泡腔内浆液渗出及炎性细胞浸润,肺泡隔断裂,间隔增宽、充血,细胞脱落等改变;青蒿琥酯联合舒氨西林在12 h时相点可明显减轻CLP模型小鼠肺组织的病理损伤,仅见少量充血,炎性细胞浸润和肺泡隔断裂。结论:1.青蒿琥酯与舒氨西林联合使用对CLP模型大鼠和小鼠均具有显著保护作用,其效果优于单独使用两种药物;2.青蒿琥酯联合舒氨西林对啮齿类CLP模型动物的保护作用可能与其降低动物血中的细菌和LPS水平、抑制炎症介质释放、减轻重要脏器的损伤有关。