水稻（Oryza sativa L.）碳酸酐酶基因5’端启动子不同区域对基因表达影响的研究

论文摘要

启动子在决定基因时空表达方面起着十分重要的作用,随着转基因技术的发明,启动子扮演着重要角色,目前植物转基因当中主要使用CaMV 35S,然而在CaMV 35S启动子大量表达外源基因的同时也产生了负面影响。因此人们更想得到能够满足不同需要的启动子,从而使基因的表达方式合乎人们的意愿,在这个需要的带动下关于启动子的前期基础研究更显其必要性。本研究以水稻碳酸酐酶基因启动子为对象,根据水稻碳酸酐酶基因5′端序列,从4处不同位置设计上游引物,在碳酸酐酶基因ATG前0位点处设计下游引物。通过PCR扩增基因5′端1,600 bp,964 bp,585 bp,313 bp片断,将以上目的片段克隆到以GUS为报告基因植物表达载体pBI121上,通过农杆菌介导法转化烟草。Southern检测目的基因已经转入植物体。通过对转化植株GUS活性染色结果表明-1,600bp～0片断启动GUS在烟草的叶、茎中有GUS活性,而其余三段区域（-964bp～0,-585 bp～0,-313 bp～0）未检测出GUS活性,这些暗示了-1,600bp～0启动子区域在控制基因表达具有在叶、茎中表达,在根中不表达的组织特异性。同时对启动子序列分析发现启动子-404 bD～-53bp区域富含GC碱基对,与人和老鼠体内碳酸酐酶Ⅱ型基因肩动子存在高GC区域相似。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 真核生物启动子类型
• 1.1.1 植物基因启动子
• 1.2 启动子的研究方法
• 1.2.1 植物基因启动子研究进展
• 1.2.2 解析植物启动子常用的报告基因
• 1.3 碳酸酐酶细胞内定位
• 1.4 碳酸酐酶基因启动子研究进展
• 1.5 本课题研究的意义
• 2 载体构建与序列分析
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌株和载体
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 载体构建
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 载体酶切鉴定
• 2.3.2 启动子序列分析
• 3 烟草的遗传转化及检测
• 3.1 材料
• 3.1.1 试剂和菌种
• 3.1.2 植物材料
• 3.2 方法
• 3.2.1 烟草的遗传转化
• 3.2.2 转基因植株的分子鉴定
• 3.2.3 GUS基因活性检测
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 抗性植株的获得
• 3.3.2 转基因植株的分子鉴定
• 3.3.3 GUS基因活性染色判断启动子不同区域对基因转录的影响
• 3.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢