续随子种子化学成分的酪氨酸酶抑制性和抗氧化性研究

论文摘要

在《千金翼方》、《外台秘要》、《普济方》等中国古籍中均记载大戟科大戟属植物续随子（Euphorbia lathyris L.）的种子可以治疗色斑、雀斑等色素沉积类疾病。现代研究认为皮肤产生过量的黑色素是引起黄褐斑、黑色素瘤等色素沉着性皮肤病的主要因素,而酪氨酸酶是黑色素生物合成过程的关键酶。本文以此为切入点,结合现代成分分析方法,通过酪氨酸酶抑制性实验,分离筛选续随子种子中具有潜在美白祛斑活性的物质,并对筛选得到的七叶内酯的酪氨酸酶抑制类型及其机理加以研究,同时对续随子种子提取物的酪氨酸酶抑制性和抗氧化性进行初步探讨,为从续随子种子中筛选出天然源的化妆品美白添加剂提供理论依据。具体内容如下：1、采用酪氨酸酶抑制性实验,测得种子醇提物的乙酸乙酯相、正丁醇相、水相和阳性对照熊果苷的半数抑制率（IC50）分别为：0.150 mg/mL、0.813 mg/mL、7.570 mg/mL和1.600 mg/mL;利用高速逆流色谱（HSCCC）法,以氯仿-甲醇-水（v/v/v,4/3/2）溶剂体系对种子醇提物的乙酸乙酯相进行分离纯化,通过酪氨酸酶抑制性实验测得各产物均具有一定的酪氨酸酶抑制性；再采用高效液相色谱法对各产物纯度进行检测、比较。结果表明：峰V纯度高且成分单一,其纯度达99.04%。采用质谱、核磁共振氢谱并结合文献报道对其进行定性分析,最终鉴定为七叶内酯。2、以L-酪氨酸和L-多巴为底物探究其抑制单酚酶、二酚酶的作用。结果表明：七叶内酯对酪氨酸酶单酚酶活性的半数抑制率为0.131 mg/mL,它以延长单酚酶作用的迟滞时间（0.3 mg/mL的七叶内酯使得迟滞时间由91s延长至385 s）和降低酶稳定态活力的方式起到单酚酶抑制作用；七叶内酯对酪氨酸酶二酚酶的半数抑制率为0.229 mg/mL。通过动力学方法分析出二酚酶的抑制作用表现为竞争性抑制类型,其抑制常数为0.398 mmol/L。3、以超氧阴离子自由基（02）、羟自由基（OH）、1,1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH）三种不同自由基体系研究续随子种子粗提物（乙酸乙酯相、正丁醇相）和七叶内酯的活性清除作用,以IC50（清除率为50%时,抗氧化剂的浓度值）为评价指标。结果表明：在实验浓度范围内,乙酸乙酯相、正丁醇相以及七叶内酯清除超氧阴离子的IC50分别为：0.62mg/mL、2.78 mg/mL、0.77 mg/mL,其清除作用均差于阳性对照Vc （0.48 mg/mL）。乙酸乙酯相、正丁醇相、七叶内酯以及Vc对DPPH的IC50分别为：0.025 mg/mL、0.112 mg/mL、0.0116 mg/mL,0.046 mg/mL,除正丁醇相外,其余两物质的DPPH清除能力要强于Vc。对羟自由基的清除作用则表现出了不同的效果,Vc和正丁醇相表现出不同程度的清除作用,其IC50分别为2.453 mg/mL、0.388 mg/mL,较之Vc,正丁醇相的羟自由基清除能力差的多；相反,乙酸乙酯相和七叶内酯在实验过程中表现出了不同程度的促羟自由基形成的效果,随着浓度的增加,其促氧化效果愈加明显。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 续随子概述
• 1.1.1 续随子形态特征及生境分布
• 1.1.2 续随子能源用和药用概述
• 1.1.3 续随子种子化学成分研究现状
• 1.2 皮肤美白机制及植物源美白剂研究现状
• 1.2.1 黑色素形成及皮肤美白机制
• 1.2.2 植物源酪氨酸酶抑制剂研究现状
• 1.2.3 植物源抗氧化剂研究现状
• 1.3 论文设计思想
• 1.3.1 选题背景
• 1.3.2 研究目的和意义
• 1.3.3 研究内容及方法
• 第二章 续随子种子酪氨酸酶抑制性的研究
• 2.1 续随子种子不同极性部位酪氨酸酶抑制性研究
• 2.1.1 材料与仪器
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.3 实验结果
• 2.1.4 讨论
• 2.2 高速逆流色谱法（HSCCC）分离乙酸乙酯相的酪氨酸酶抑制性物质
• 2.2.1 材料与仪器
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.3 实验结果
• 2.2.4 讨论
• 2.2.5 附录:七叶内酯的质谱、氢谱图
• 第三章 七叶内酯对酪氨酸酶的抑制性及其抑制机理的研究
• 3.1 七叶内酯对酪氨酸酶抑制性的研究
• 3.1.1 材料与仪器
• 3.1.2 实验部分
• 3.1.3 实验结果
• 3.1.4 讨论
• 3.2 七叶内酯对蘑菇酪氨酸酶抑制机理的研究
• 3.2.1 材料与仪器
• 3.2.2 实验部分
• 3.2.3 实验结果
• 3.2.4 讨论
• 第四章 续随子种子抗氧化活性研究
• 4.1 材料与仪器
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 仪器
• 4.1.3 试剂
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 续随子种子乙酸乙酯相、正丁醇相和七叶内酯对超氧阴离子自由基清除活性的测定
• 4.2.2 续随子种子乙酸乙酯相、正丁醇相和七叶内酯对羟自由基清除活性的测定
• 4.2.3 续随子种子乙酸乙酯相、正丁醇相和七叶内酯对DPPH自由基清除活性的测定
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 超氧阴离子的清除作用
• 4.3.2 羟自由基的清除作用
• 4.3.3 对DPPH自由基的清除作用
• 4.4 讨论
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 研究生期间科研成果
• 致谢