论文摘要
研究背景:虽然骨科基础、临床研究有了很大的进步和发展,但是关节软骨损伤的治疗仍然是一个难以解决的问题。众所周知,部分软骨损伤不能自行修复,而全层骨软骨损伤能够由纤维软骨修复,但是这种修复组织缺乏正常软骨组织所具有的生物学、生物化学、和生物力学特性,因此在关节活动过程中,压力的刺激下,很容易退变。为此,各种各样的手术（如转孔术、关节成形术、微骨折等）,被应用于临床,试图刺激骨髓干细胞,产生具有接近透明软骨特性的软骨来修复软骨缺损,但事实证明,这些修复组织在压力刺激下很快发生退变。本研究试图以接近人类膝关节解剖结构的中国山羊为动物模型,研究它的软骨细胞在体外分离、培养、快速扩增的方法;在藻酸钙培养中的特性;观察自体软骨细胞复合藻酸钙修复山羊膝关节负重区软骨缺损的结果,以及修复过程中CPM（continuous passive motion,持续被动活动仪）对修复结果的影响。 方法:（1）取肩关节软骨组织,体外分离、培养软骨细胞、对培养的软骨细胞进行蕃红“O”、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化染色等表型鉴定。（2）将鉴定证实为具有正常表型的软骨细胞和cyteodex-3放入RCCS（rotary cell culture system,旋转细胞培养系统）培养,和单层培养做对比,观察微载体表面细胞的生长情况,用DNA的变化定量,观察两种培养方式细胞扩增的情况,并对RCCS培养的软骨细胞进行表型鉴定。（3）将鉴定证实为具有正常表型的软骨细胞和藻酸钙凝胶复合,观察藻酸钙凝胶内细胞的生长情况,用荧光分光光度计和紫外分光光度计观察DNA及GAG的量的变化,同时对藻酸钙凝胶培养的软骨细胞进行表型鉴定。（4）收集经藻酸钙培养的软骨细胞和基质,体外培养组织工程化软骨并对其进行组织学和免疫组化鉴定。（5）于山羊股骨髁负重面行直径6mm全层软骨缺损,分别以空白（缺损内未植入任何组织）;骨膜覆盖;藻酸钙凝胶填充缺损+骨膜覆盖;复合自体软骨细胞
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