论文摘要
第一部分胰腺导管上皮细胞的原代、传代培养和转染目的完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养,成功转染PDX-1基因进入胰腺导管上皮细胞。方法用含有胶原酶V型的消化液对大鼠胰腺组织进行消化分离,接着用梯度离心法将导管上皮细胞分离纯化,在体外经RPMI1640及含10%胎牛血清（FBS）的培养液培养,在达到80%～90%的细胞汇合时,1∶2传代培养。传代3～5次后接种于6孔板中转染重组载体PDX-1（XlHbox8VP16）,分转染组与非转染组。结果获得的原代培养细胞有上皮细胞的生长排列方式,可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞可传代培养到第3～5代不等。结论我们的原代培养和传代培养的方法能在体外培养出较纯的胰腺导管上皮细胞,并能进行成功转染PDX-1。第二部分体外转染PDX-1在胰腺导管上皮细胞分化中的作用及衍生胰岛细胞功能鉴定目的体外观察转染PDX-1对胰腺导管上皮细胞分化为胰岛细胞的作用。方法对转染组与非转染组细胞进行培养,取各时间点细胞进行实验,实时定量RT-PCR检测细胞中PDX-1,胰岛素mRNA的表达。Western blotting检测细胞中PDX-1,胰岛素蛋白的表达。放射免疫法测定衍生胰岛细胞的分泌功能,双硫腙染色检测胰岛细胞。结果转染组与非转染组相比,转染的细胞中有XlHbox8 mRNA的表达,且PDX-1,胰岛素mRNA以及蛋白的表达也增加。生成的胰岛细胞数量及胰岛素分泌量明显增加（葡萄糖浓度5.6 mmol/L时胰岛素分泌量1.32±0.43 vs 3.48±0.81,葡萄糖浓度16.7 mmol/L时胰岛素分泌量4.86±1.15 vs 10.25±1.32）,差异有显著性（P<0.01）。结论PDX-1能显著促进胰腺导管上皮细胞分化为胰岛细胞。用此法获得大量的胰岛可能为糖尿病治疗提供一条新的途径。
论文目录
相关论文文献
- [1].PDX-1基因克隆载体的体外构建[J]. 山东医药 2016(04)
- [2].PDX-1与乳腺癌关系的研究[J]. 现代预防医学 2011(17)
- [3].左归丸对妊娠糖尿病大鼠血清相关指标及胰腺PDX-1表达的影响[J]. 中国实验方剂学杂志 2020(19)
- [4].宫内生长受限新生大鼠胰腺PDX-1的表达及意义[J]. 中国优生与遗传杂志 2011(06)
- [5].大鼠骨髓间充质干细胞Pdx-1基因表达水平的调控及意义[J]. 河南医学研究 2011(04)
- [6].PDX-1、β-连接素在乳腺癌中表达及预后关系的临床研究[J]. 中国现代医学杂志 2014(04)
- [7].番石榴叶对2型糖尿病大鼠PDX-1基因表达的影响[J]. 医学综述 2008(15)
- [8].用pdx-1和EGFP建立核定位信号的实验教学模型[J]. 昆明医学院学报 2009(03)
- [9].脐血干细胞对1型糖尿病大鼠血糖及PDX-1、MafA表达水平的影响[J]. 中国组织工程研究 2015(36)
- [10].子宫内慢性缺氧对子代大鼠胰腺Pdx-1基因表观遗传机制改变的研究[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版) 2016(06)
- [11].PDX-1基因转染人脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化及移植治疗1型糖尿病[J]. 中国组织工程研究 2017(13)
- [12].PDX-1联合利拉鲁肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞的效果[J]. 郑州大学学报(医学版) 2016(02)
- [13].枸杞多糖对2型糖尿病大鼠胰腺β细胞PDX-1基因表达的实验研究[J]. 中国医药科学 2013(01)
- [14].不同纯度携带干细胞胰岛转分化培养前、后PDX-1的表达研究[J]. 生命科学研究 2009(01)
- [15].PDX-1腺病毒载体构建及其在脂肪间充质干细胞中的表达[J]. 生物学杂志 2014(01)
- [16].罗格列酮对2型糖尿病大鼠胰腺PDX-1基因表达的影响[J]. 广东医学院学报 2015(02)
- [17].PDX-1与胰岛B细胞功能[J]. 医学综述 2008(16)
- [18].Apelin对葡萄糖的毒性作用及对胰岛细胞PDX-1表达的影响[J]. 重庆医学 2016(33)
- [19].Exendin-4对抵抗素介导的βTC6细胞PDX-1表达损害及细胞凋亡的干预作用[J]. 福建医科大学学报 2014(06)
- [20].PDX-1基因对人胚肾细胞胰岛发育相关基因表达的影响[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2010(05)
- [21].PDX-1蛋白对TNF-α和IL-1β诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用[J]. 中国实用神经疾病杂志 2010(09)
- [22].乳腺癌组织中PDX-1蛋白及mRNA的表达变化[J]. 山东医药 2009(42)
- [23].5-氮杂-2′-脱氧胞苷联合曲古霉素 A 对高糖诱导下胰岛 β 细胞的增殖及 PDX-1 甲基化的影响[J]. 实用医学杂志 2016(06)
- [24].烟酰胺单核苷酸对RIN-m5f细胞中胰岛素分泌及PDX-1和FoxO1基因表达的影响(英文)[J]. 中南大学学报(医学版) 2011(10)
- [25].PDX-1基因提高脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞能力的研究前景[J]. 临床普外科电子杂志 2014(04)
- [26].PDX-1对胰岛β细胞增殖、分化及胰岛素分泌作用的研究进展[J]. 广东医学院学报 2013(03)
- [27].小鼠不同细胞间表观遗传修饰的变化对Pdx-1基因转录表达的影响[J]. 中国病理生理杂志 2010(04)
- [28].杨梅多酚提取物对高糖损伤INS-1细胞活性及Pdx-1表达的影响[J]. 中国食品学报 2019(04)
- [29].PDX-1在人脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞中的作用[J]. 山东医药 2016(25)
- [30].Oct4介导小鼠原代肝细胞直接重编程为Pdx-1阳性细胞[J]. 现代生物医学进展 2013(01)
标签：原代培养论文; 传代培养论文; 胰腺导管上皮细胞论文; 胰岛论文; 分化论文;