麦冬高异黄酮的制备及其抗非小细胞肺癌细胞活性研究

论文摘要

麦冬（Radix Ophiopogonis）为常用中药,为百合科沿阶草属植物麦冬（Ophiopogon Japonicus（L.f）KerGawl）的块根。本论文对麦冬中高异黄酮类成分提取工艺,主要成分的分离纯化、结构确证、标准品标准、含量测定方法、抗非小细胞肺癌细胞体外活性进行研究,结果如下:本论文对麦冬中高异黄酮类成分提取工艺,主要成分的分离纯化、结构确证、标准品标准、含量测定方法、抗非小细胞肺癌细胞体外活性进行研究,结果如下:1、麦冬中总高异黄酮类成分萃取新工艺优化。采用正交设计对超临界CO2萃取方法进行工艺优化,结果表明:超临界CO2萃取麦冬高异黄酮类成分的最佳条件是萃取温度为55℃,萃取压力20MPa,萃取时间120min,95%乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合夹带剂用量2.0ml/g,CO2流量4.8kg/h,总高异黄酮萃取率为1.67‰。该工艺与采用有机溶剂提取方法比较,具有经济、环保、效率高和成本低的特点。2、麦冬高异黄酮类成分结构确证经过反复研究,优选出硅胶G柱层析及结晶进行化合物H1的分离纯化,硅胶G柱层析与Sephadex LH-20联用进行化合物H2的分离纯化,硅胶G柱层析与Sephadex LH-20联用进行化合物H3的分离纯化,硅胶G柱层析、制备薄层与Sephadex LH-20联用进行化合物H4的分离纯化。采用上述方法分离纯化获得化合物H1、H2、H3、H4,经理化性质测定和波谱解析,分别鉴定为6-甲酰基沿阶草酮甲（6-Aldehydo-3-Ophiopogonanone A）、甲基沿阶草酮甲（Methyl ophiopogonanone A）、沿阶草酮甲（Ophiopogonanone A）、甲基沿阶草酮甲乙酸酯（Methyl ophiopogonanone A Monoacetate）,在此基础上完成对照品制备。3、麦冬高异黄酮类成分的测定方法研究经过反复试验,筛选HPLC测定麦冬中高异黄酮类成分含量的最佳方法。6-甲酰基沿阶草酮甲:色谱柱:Hypersil C18柱（150mm×4.6mm,5μm）;流动相:乙腈-0.5%磷酸溶液（75:25）;流速:1.0mL·min-1;检测波长:275nm;柱温:室温;药材中6-甲酰基沿阶草酮甲的含量为42.76～44.71μg·g-1。甲基沿阶草酮甲:色谱柱:Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:甲醇-水（76:24）;流速:1.0 ml·min-1;检测波长:296nm;药材中甲基沿阶草酮甲的含量为58.45～63.6μg·g-1。沿阶草酮甲:色谱柱:Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:甲醇-水（76:24）;流速:1.0 ml·min-1;检测波长:296nm;药材中沿阶草酮甲的含量为87.28～93.86μg·g-1。甲基沿阶草酮甲乙酸酯:色谱柱:Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:甲醇-水（10:90）;流速:1.0ml·min-1;检测波长:280nm;药材中甲基沿阶草酮甲的含量为110.67～122.32μg·g-1之间。三种高异黄酮同时测定:色谱柱:Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:乙腈-0.5%磷酸溶液（58:42）;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:0-14min,296nm,14-22min,275 nm;柱温:室温;药材中6-甲酰基沿阶草酮甲、甲基沿阶草酮甲、沿阶草酮甲的含量分别为: 34.42-37.49μg·g-1、56.15-62.31μg·g-1、86.52-95.77μg·g-1。4、麦冬高异黄酮类成分抗非小细胞肺癌细胞的体外活性评价采用MTT测定高异黄酮对非小细胞肺癌细胞的抑制作用,结果表明高异黄酮对A549有明显的抑制作用（P<0.05）,且呈现明显的量效关系。在24、48、72h时,6-甲酰基沿阶草酮甲的IC50分别为41.27、24.90、13.53μg·ml-1,甲基沿阶草酮甲的IC50分别为92.22、54.57、28.38μg·ml-1,沿阶草酮甲的IC50分别为76.99、48.79、28.22μg·ml-1,甲基沿阶草酮甲乙酸酯的IC50分别为83.77、70.56、51.59μg·ml-1。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写索引
• 前言
• 1 麦冬高异黄酮类成分的提取新工艺研究
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 实验方法
• 1.2 实验结果
• 1.2.1 正交试验结果
• 1.2.2 数据分析
• 1.2.3 工艺验证
• 1.4 小结与讨论
• 2 麦冬高异黄酮类化学成分的分离纯化
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 薄层色谱图
• 2.2.2 高效液相色谱检测
• 2.5 小结与讨论
• 3 麦冬高异黄酮类化学成分的结构确证
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验方法
• 3.2 结果
• 1的结构确证'>3.2.1 化合物H₁的结构确证
• 2的结构确证'>3.2.2 化合物H₂的结构确证
• 3的结构确证'>3.2.3 化合物H₃的结构确证
• 4的结构确证'>3.2.4 化合物H₄的结构确证
• 3.3 小结与讨论
• 4 麦冬高异黄酮类化学成分测定方法研究
• 4.1 麦冬中总高异黄酮含量测定方法
• 4.1.1 材料与方法
• 4.1.2 结果
• 4.2 麦冬中 6-甲酰基沿阶草酮甲含量测定方法
• 4.2.1 材料与方法
• 4.2.2 结果
• 4.3 麦冬甲基沿阶草酮甲含量测定方法
• 4.3.1 材料与方法
• 4.3.2 结果
• 4.4 麦冬中沿阶草酮甲含量测定方法
• 4.4.1 材料与方法
• 4.4.2 结果
• 4.5 麦冬中甲基沿阶草酮甲乙酸酯含量测定方法
• 4.5.1 材料与方法
• 4.5.2 结果
• 4.6 麦冬中3 种高异黄酮含量同时测定方法
• 4.6.1 材料与方法
• 4.6.2 结果
• 4.7 小结与讨论
• 5 麦冬高异黄酮抗非小细胞肺癌细胞的体外活性评价
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 仪器
• 5.1.2 细胞
• 5.1.3 试剂与试药
• 5.1.4 实验方法
• 5.2 结果
• 5.2.1 高异黄酮对A549 的生长抑制作用
• 5.2.2 高异黄酮对A549 的半抑制浓度
• 5.3 小结与讨论
• 6 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录1 化合物结构分析图谱
• 附录2 对照品质量标准草案
• 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果