论文摘要
[目的] 在淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中鉴定视蛋白基因(NYD-OP7)的表达差异,获取NYD-OP7全长序列,并构建NYD-OP7原核和真核表达载体,为进一步研究奠定基础。 [方法] 用荧光定量PCR法鉴定NYD-OP7在淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中的表达差异。用RT-PCR法从抗性品系中扩增NYD-OP7全长序列,对NYD-OP7编码的蛋白用BlastX软件在NCBI和SwissProt数据库中进行同源性比对,用Clustalw软件进行聚类分析,用EMBL pI/Mw tool计算等电点和分子量,Signl3.0软件进行信号肽分析,ProtScale软件进行疏水性分析,PSORT Ⅱ软件进行细胞定位分析,PatSearch软件进行基序分析,SMART软件进行蛋白质结构域分析。通过基因重组方法构建NYD-OP7原核和真核表达载体。 [结果] 荧光定量PCR结果显示,NYD-OP7在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的9.78倍。获得淡色库蚊NYD-OP7完整开读框序列,为1116bp,经推导编码371个氨基酸(GenBank/NCBI AY749413,2004),与淡色库蚊NYD-OP1~6基因编码的视蛋白同源性最高,为91~93%。成功构建NYD-OP7原核和真核表达载体。 [结论] NYD-OP7在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-OP7与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关,值得进一步研究。
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