贡菊茎尖愈伤组织诱导及其黄酮类化合物提取的研究

论文摘要

贡菊中主要含有龙脑、乙酸乙脑酯、氨基酸、维生素、黄酮类物质等。黄酮类化合物主要是一类以2-苯基色原酮为基核的化合物,一般具有C6-C3-C6的基本结构,是植物次生代谢产物,广泛地存在于自然植物中,以游离态或与糖结合为苷的形式存在,不仅数量种类繁多,而且结构类型复杂多样,表现出多种多样的药理活性,能防治心脑血管系统的疾病和呼吸系统的疾病,具有抗炎抑菌,降血糖,抗氧化,抗辐射,抗癌,抗肿瘤以及增强免疫能力等药理作用。为了进一步开发利用贡菊资源及寻找有效的降血糖、增强免疫能力等方面的药物,对贡菊黄酮提取、纯化、鉴定以及生化和药理活性进行深入的研究是必要的。本研究主要包括两个部分,第一部分主要的目的是通过茎尖剥离和组织培养技术,培养出贡菊茎尖愈伤组织;第二部分主要是使用两种方法提取贡菊茎尖愈伤组织中黄酮类化合物,两种方法分别是醇提法和加酶处理醇提法,对比研究两种提取法,并对提取物中的黄酮类化合物进一步定性分析、定量测定。为了培养出贡菊茎尖愈伤组织,本实验从无病虫害、生长健壮的黄山贡菊植株上选取茎尖,灭菌消毒处理,无菌水冲洗干净后接种到合适培养基中。结果表明,除少量染菌外,大多数茎尖生长良好,膨大成小颗粒状愈伤组织。观察、计算结果显示,愈伤组织的诱导频率为44.38%,愈伤组织的生长曲线大致呈“S”型。用最佳的酶解醇提方案,提取贡菊茎尖愈伤组织中的黄酮类化合物。结果表明,较之普通生长健壮的茎尖,茎尖愈伤组织中的总黄酮得率提高24.6%,总黄酮含量增加了25.8%,聚酰胺薄膜薄层层析结果显示,两种提取物中的化学成份没有变化。综上所述,本实验研究的要点如下:黄山贡菊茎尖愈伤组织的培养可以大大提高贡菊中有效活性物质的含量,为黄山贡菊的优化培育提供一个基本实验基础。同时,本研究也为贡菊黄酮的提取、纯化、鉴定提供了一个相对科学的研究方法。通过酶解作用可以大大提高植物体内有效活性成分的浸出率,从而为进一步高效地提取黄酮类化合物提供了一个基本的科学实验依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 引言
• 1.1 研究目的和意义
• 1.2 研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 供试植物材料
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 主要仪器与设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 培养条件
• 2.2.2 愈伤组织的诱导
• 2.2.3 愈伤组织的诱导频率和生长量的测定
• 2.2.4 浸出过程
• 2.2.5 影响浸出的主要因素
• 2.2.6 贡菊花黄酮的提取工艺流程
• 2.2.7 芦丁标准曲线的绘制
• 2.2.8 实验方案
• 2.2.8.1 贡菊黄酮提取条件的优化
• 2.2.8.2 酶解（乙）醇提取法
• 2.2.8.3 贡菊茎尖愈伤组织酶解醇提
• 3 实验数据及结果分析
• 3.1 愈伤组织的诱导频率
• 3.2 生长量
• 3.2.1 愈伤组织生长量
• 3.2.2 愈伤组织生长曲线
• 3.3 醇提法的数据及结果
• 3.3.1 选用不同浓度的乙醇进行实验
• 3.3.2 浸提温度的影响
• 3.3.3 浸提时间的影响
• 3.3.4 贡菊花黄酮提取的正交实验结果
• 3.3.5 贡菊黄酮颜色反应
• 3.3.6 紫外吸收光谱分析
• 3.4 酶法提取的数据及结果
• 3.4.1 酶解工艺参数研究
• 3.4.1.1 酶浓度对酶解的影响
• 3.4.1.2 酶解温度对总黄酮得率的影响
• 3.4.1.3 酶解时间的选择
• 3.4.1.4 酶解pH值的选择
• 3.4.2 复合酶酶解正交实验结果
• 3.4.3 不同处理方式对总黄酮提取的影响
• 3.4.4 不同处理方式醇提黄酮的UV吸收光谱
• 3.4.5 聚酰胺薄膜薄层层析
• 3.5 贡菊茎尖愈伤组织酶解醇提数据与分析
• 3.5.1 总黄酮得率和总黄酮含量
• 3.5.2 聚酰胺薄膜薄层层析
• 4 讨论
• 4.1 实验方法
• 4.2 关于染菌接种瓶的处理
• 4.3 有关提取方法的影响
• 4.3.1 直接溶剂（乙醇）提取法
• 4.3.2 酶解醇提法
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介