实时定量逆转录聚合酶链反应检测慢粒bcr/abl融合基因的研究

论文摘要

目的建立实时定量逆转录聚合酶链反应（RQ-PCR）检测慢性粒细胞白血病（CML）bcr／abl融合基因的方法，为CML临床诊断及微小残留病（MRD）监测提供重要诊断依据。方法采用传统的逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增K562细胞管家基因GUS及融合基因bcr／abl，以梯度稀释的扩增产物为标准品构建标准曲线，建立RQ-PCR方法检测bcr／abl融合基因，并评价此方法的检测限度、灵敏度、稳定性和可靠性。定量检测19例CML患者的外周血或骨髓样本中bcr／abl融合基因表达水平，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析扩增产物类型。结果建立的GUS和bcr／abl标准曲线相关系数达到03999以上；RQ-PCR方法最低限度可检测出约10-5μgK562总RNA中的bcr／abl融合基因，重复性和稳定性实验的CT值变异系数（CV）分别为：2.59％，3.25％；在19例CML患者中18例bcr／abl融合基因检测结果为阳性，灵敏度为94.7％；正常对照未检测到扩增，假阳性率为0％。19例CML患者中，16例Ph染色体阳性（Ph+）者bcr／abl融合基因表达均为阳性；3例Ph-中，2例为其它染色体异常经RQ-PCR方法检测bcr／abl融合基因阳性，另1例Ph染色体和bcr／abl融合基因同为阴性。18例bcr／abl融合基因阳性患者，其融合基因表达量相对值的范围为1.20×10-4-3.90×10-1，中位数为1.58×10-2。慢性期、加速期和急变期CML患者bcr／abl融合基因表达量相对值分别为（1.22±1.50）×10-2、（1.72±0.86）×10-1和（2.87±0.90）×10-1，三者的bcr／abl融合基因表达水平呈递增趋势，差异有显著性（P＜0.05）。18例融合基因阳性扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，b3a2（+）为66.7％（12／18），b2a2（+）为27.8％（5／18），b3a2+b2a2（+）为5.5％（1／18）。结论1、Ph染色体及bcr／abl融合基因均为CML重要的诊断指标；2、RQ-PCR方法检测CML患者的bcr／abl融合基因，灵敏度高，重复性好，阳性检出率为94.7％，高于细胞遗传学方法；3、bcr／abl融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系相一致，有助于反映白血病细胞负荷、评价疗效及判断疾病预后；4、可以检测出b3a2和b2a2两种类型的融合基因转录本，能够广泛用于临床CML的诊断和病人治疗过程中MRD的检测。

论文目录

• 一、英文缩略词表
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、论文正文
• 引言
• 资料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 五、综述
• 六、发表文章
• 七、致谢