不同禽源H5亚型AIV HA的抗原性变异和遗传变异研究

论文摘要

禽流感（Avian Influenza,AI）是由A 型流感病毒引起的禽类烈性传染病,迄今发生的高致病性禽流感（Highly PathogenicAvian Influenza,HPAI）都是由H5 和H7 两个亚型的病毒引起的。近年来,禽流感又出现了新的动向,如感染水禽并导致高死亡率,感染人类并致人死亡等,这些可能是禽流感病毒的变异引起的。学者们研究表明,血凝素（Hemagglutinin,HA）基因是禽流感病毒基因组中变异最大的基因,禽流感病毒的抗原性和致病性很大程度上取决于该基因的变异情况。HA 在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用,可刺激机体产生中和抗体来中和病毒的感染力,而且HA 诱导机体产生的体液免疫反应,对宿主抵抗禽流感起到了决定性保护作用。基于上述情况,我们有目的的选取了不同禽源的H5 亚型禽流感病毒,对其HA 基因进行抗原性变异和遗传变异方面的研究,实验共分两部分。第一部分:H5 亚型禽流感病毒HA 的抗原性差异研究将不同禽源的H5 亚型禽流感病毒接种于SPF 鸡胚,收集尿囊液,制备DJ02与LS02 两株病毒分离株的抗原来免疫SPF 鸡,获得两株毒株的单因子血清,通过交互血凝抑制试验从血清学方面比较不同禽源毒株的抗原性差异。结果表明:结果表明:毒株间血凝抑制价相差1-4 个滴度,说明存在抗原性差异;鸡源毒株间抗原性差异较小,鹅源毒株和其余毒株HA 间抗原性差异较大。第二部分:H5 亚型禽流感病毒HA 遗传变异研究将8 株病毒接种于SPF 鸡胚,收集尿囊液,提取病毒基因组RNA,利用RT-PCR 技术成功扩增出与预期设计的1.7kb 大小相符合的HA 基因特异条带,将扩增产物克隆、测序。测序结果表明:扩增得到8 株分离株HA 基因编码区的cDNA 序列,长度为1741 个核苷酸（YT04 为1744）,包含的完整阅读框架长度为1707 个核苷酸（YT04 为1710）,共编码568 个氨基酸（YT04 编码569）。这些毒株的HA 裂解位点处均具有多个碱性氨基酸,序列为R-R-R-K-K-R,符合高致病力毒株裂解位点的特征性序列,表明这8 株病毒是高致病力毒株。同源性分析表明,8 株毒株HA 基因间的核苷酸同源性在94.8%～99.7%之间,氨基酸同源性在93.5%～99.1%之间,8 株毒株同属于欧亚种系,而且与97 年香港毒株HK97 核苷酸的同源性在95.3%以上。遗传进化关系分析表明,BZ01 和

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 文献综述
• 第二章 不同禽源H5 亚型禽流感病毒HA 抗原性差异研究
• 1 材料
• 2 试剂配制
• 3 方法
• 4 结果
• 5 讨论
• 第三章 不同禽源H5 亚型禽流感病毒HA 遗传变异研究
• 1 材料
• 2 试剂配制
• 3 方法
• 4 结果与分析
• 5 讨论
• 结论
• 参考文献
• 符号说明
• 附录
• 致谢
• 发表文章