金免疫幽门螺杆菌抗原检测方法的探讨与研究

论文摘要

目的:探讨斑点胶体金免疫法检测患者不同体液中幽门螺杆菌(HP)抗原的可行性,为临床研发简单易用的“HP抗原金免疫色谱检测试剂盒”提供实验依据。方法:(1)收集筛选高效价兔和人HP免疫血清,盐析法和层析法分离纯化得到HP多克隆抗体。(2)采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的特异性人抗Hp抗体,制成金标抗体。(3)将纯化的特异性兔抗HP抗体固定于硝酸纤维素膜上,制成斑点金标免疫反应模板。分别取粪便、胃液、血清与反应模板结合,然后与金标记的人抗HP抗体于37℃进行反应,阳性结果呈现肉眼可见的红斑。结果: (1)斑点金免疫法对比测定42例患者的胃液、粪便及血清,其中胃液斑点金法测定阳性26例,阴性16例,阳性率61.9%,准确性69.04%;粪便斑点金法测定阳性27例,阴性15例,阳性率64.29%,准确性57.14%;血清斑点金法测定阳性10例,阴性32例,阳性率23.81%,准确性40.48%。(2)胃液斑点金法与尿素酶试验对比检测60例患者,其诊断符合率61.67%。(3)胃液斑点金法与血清学HP抗体检测对比测定60例患者,其诊断符合率65%。结论:(1)斑点金法检测胃液HP抗原诊断HP感染是可行的。(2)斑点金法检测胃液HP抗原的准确性高于粪便和血清HP抗原的检测。(3)斑点金法检测粪便HP抗原的阳性率虽然高于胃液和血清HP抗原的检测,但是粪便HP抗原检测的假阳性率也高。(4)斑点金法检测HP抗原具有操作简便、快速,无创伤,结果判断无须依靠任何仪器,还可以避免抗体检测“实时性差”的缺陷等优点,发展前景广阔。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 主要试剂
• 2.2 主要仪器
• 2.3 研究对象
• 2.4 HP 免疫血清制备
• 2.4.1 人HP 免疫血清的制备
• 2.4.2 兔HP 免疫血清的制备
• 2.5 试验方法
• 2.5.1 血清 IgG 抗体的粗提
• 2.5.2 血清 IgG 抗体的纯化
• 2.5.3 纯化IgG 抗体的鉴定
• 2.5.4 胶体金颗粒的制备
• 2.5.5 人IgG 抗体与胶体金用量比例的确定
• 2.5.6 金标人IgG 抗体的制备及纯化
• 2.5.7 斑点金免疫 HP 抗原的检测
• 2.5.8 尿素酶试验和血清 H.pylori Ab-IgG 抗体的检测
• 2.5.9 斑点金免疫 HP 抗原检测效果的评价
• 2.5.10 统计学方法
• 第3章 结果
• 3.1 HP 多克隆抗体IgG 的制备
• 3.2 胶体金最适标记抗体蛋白浓度的确定
• 3.3 斑点金免疫HP 抗原试验的检测结果
• 3.4 斑点金免疫胃液HP 抗原试验与RUT 试验的比较
• 3.5 斑点金免疫胃液HP抗原试验与血清HP抗体检测的比较
• 第4章 讨论
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 攻读硕士学位期间研究成果