菊花高频再生体系建立及农杆菌介导FT基因转化的研究

论文摘要

菊花是原产于我国的十大名花之一,但是绝大多数品种的菊花自然花期集中在11月左右,能够在夏季或早秋开花的只有少数花色单调、花型较小的品种。因此菊花的生产发展因为其花期问题受到了严重制约。FT基因是一个激酶抑制蛋白,可以通过对CO对FT的调节促进开花。本试验旨在通过对菊花高效再生体系及根癌农杆菌介导的转化体系的研究,将FT基因导入到菊花品种‘神马’中,以期获得花期提前的菊花新品种,并为广泛运用转基因技术改良菊花品种打下基础。本试验以菊花品种‘神马’为试验材料。研究了不同激素浓度配比对菊花直接诱导不定芽再生以及对生根诱导的影响,对菊花的再生条件进行了优化,从而获得了菊花叶片高速快效的再生体系。试验结果表明,将菊花‘神马’叶盘接种在MS+NAA 1mg/L+6-BA 1mg/L培养基上,经过20天的组织培养后,可直接再生出不定芽,而且再生率高达95.5%,再生芽在1/2MS+NAA 0.7mg/L培养基上经过10天左右可诱导出根,生根率可达100%。在菊花品种‘神马’高效再生体系建立的基础上,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法对其遗传转化进行了研究。研究结果表明,叶盘预培养时间、侵染时间、共培养时间以及延迟培养时间均对菊花的遗传转化效率有较大影响。同时得出经过预培养12h的叶盘置于菌液侵染5min,黑暗共培养3d;延迟筛选3d时菊花遗传转化率最高。共培养后将叶盘接种到MS+NAA 1mg/L+6-BA 1mg/L+Km 20mg/L培养基上进行抗性芽的筛选培养。25天后可直接分化出不定芽,当不定芽长到1-2cm左右时转到1/2MS+NAA 0.7mg/L+Km 20mg/L培养基上进行生根筛选培养。在加km的培养基中连续筛选8周以上,将期间产生的抗性芽切下接种在含有20mg/L km的生根培养基中进行二次筛选,提取能够正常生根的抗性苗的DNA,进行PCR检测,共获得PCR阳性植株7株,转化率大约0.9%.说明目的基因FT整合到菊花的基因组中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 花期调控
• 1.1.1 营养生长
• 1.1.2 花芽分化
• 1.1.3 光周期
• 1.1.4 温度
• 1.1.5 生长调节物质
• 1.2 FT 基因研究进展
• 1.2.1 FT 基因的生物学特征
• 1.2.2 FT 信号的转移性研究进展
• 1.2.3 FT 基因的转化研究
• 1.3 农杆菌的研究进展
• 1.3.1 农杆菌转化植物的步骤
• 1.3.2 农杆菌介导转化的特点
• 1.3.3 转化方法
• 1.3.4 影响农杆菌介导的植物基因转化的主要因素
• 1.4 菊花育种现状
• 1.4.1 辐射育种
• 1.4.2 杂交育种
• 1.4.3 组织培养育种
• 1.4.4 芽变选种
• 1.4.5 菊花基因工程育种
• 1.5 研究的目的意义
• 2 材料与方法
• 2.1 菊花高效再生体系的建立
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 转化体系的建立及FT 基因的导入
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.3 转基因植株的检测
• 3 结果与分析
• 3.1 菊花快速高效再生体系的建立
• 3.1.1 生长调节剂对直接诱导不定芽分化的影响
• 3.1.2 植物生长调节剂对生根诱导的影响
• 3.2 转化体系的建立及FT 基因的导入
• 3.2.1 卡那霉素对叶盘存活率的影响
• 3.2.2 卡那霉素对生根的影响
• 3.2.3 Cef 抑菌浓度的确定
• 3.2.4 预培养时间对转化的影响
• 3.2.5 侵染时间对转化的影响
• 3.2.6 共培养时间对转化的影响
• 3.2.7 延迟培养时间对转化的影响
• 3.2.8 转基因植株的PCR 检测
• 4 讨论
• 4.1 菊花高频再生体系的建立
• 4.2 组织培养中的玻璃化现象
• 4.3 对菊花遗传转化效率低下的原因及提高其遗传转化效率的探讨
• 4.4 假阳性苗的产生
• 5 结论
• 5.1 菊花再生体系的建立
• 5.2 遗传转化体系的优化
• 5.3 PCR 检测
• 参考文献
• 图版Ⅰ
• 图版Ⅱ
• 在读期间发表的学术论文
• 作者简介
• 致谢