论文摘要
目的：研究原发膜性肾病的尿液蛋白质谱特点,并与健康人尿蛋白谱进行比较,筛选出膜性肾病中差异表达的蛋白质,探讨质谱技术对该病的临床诊断意义。方法：留取健康人（n=3）及原发性膜性肾病患者（n=9）的清晨中段尿,为避免细菌生长和蛋白酶解于1小时内放置于-80℃冰箱保存备用。取出12份标本溶解完全后,用直径为0.22μm的微孔超滤膜过滤除去较大的杂质,再用-20℃预冷丙酮进行蛋白沉淀,置于-20℃冰箱过夜后,经4℃4000×g离心20分钟,弃上清液,留取含尿蛋白的沉淀物,真空干燥浓缩。浓缩干燥的蛋白沉淀物用PBS充分溶解后应用Bradford法测定蛋白浓度。据测定的标本浓度称取每例样品各1mg蛋白质的混合固体充分酶解后调整蛋白浓度为1ug/ul,行高效液相色谱电喷雾串联质谱（HPLC-ESI-MS/MS）,得到的肽序列结果用MASCOT软件行数据库检索,所用的库为ipi.human,v3.05。将查得的蛋白序列号在Uniprot数据库中进行检索,查询所表达的蛋白质名称、蛋白的作用及细胞学定位等相关信息。结果：健康人3份标本中共鉴定出101种蛋白质,通过手工验证,所有3份标本共同表达了37种蛋白质。膜性肾病患者的9份尿液标本共检测到174种蛋白质,所有9份标本共同表达了20种蛋白质。从膜性肾病共有的20种蛋白中手工剔除正常人尿液中也存在的蛋白,还剩余8种蛋白质,他们分别是血浆铜蓝蛋白、Igλ链C区、α-1酸糖蛋白、维生素D结合蛋白、富含亮氨酸的α2糖蛋白、对ATP敏感的内向整流钾离子通道受体11、钙结合蛋白39、IPI00745619（未知蛋白）。结论：采用HPLC-ESI-MS/MS质谱分析的方法鉴定了原发性膜性肾病尿液蛋白质,成功的获得了该疾病的多肽序列质谱图,最终得到174个蛋白质。其中血浆铜蓝蛋白、富含亮氨酸的α2糖蛋白、α1B糖蛋白、维生素D结合蛋白、钙结合蛋白39有可能成为疾病的生物标记物。
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