论文摘要
Bretscher和Cohn在T细胞活化双信号模型的基础上提出“协同刺激信号”，即T细胞的活化除了需要通过APC递呈MHC-抗原肽给抗原特异性T细胞提供第一信号外，还需要一系列协同刺激分子提供第二信号，进而才能使T细胞达到生理活化阈值产生正常的免疫应答，如果缺少共刺激分子提供的第二信号，将会导致T细胞的无反应性或特异性免疫耐受甚至进入凋亡。正性和负性协同刺激信号的调节及两者之间的平衡在机体免疫应答的整个过程中起着重要的调节作用。 共刺激分子分为TNF／TNFR和B7／CD28两大超家族，近几年，B7家族成员不断扩大，其中B7-H1是新近发现的共刺激分子之一，B7-H1具有IgV和IgC样区、跨膜区和胞浆区，该分子具有广泛的组织表达谱，甚至在一些肿瘤细胞株上也有较高表达。PD-1是B7-H1的一个抑制性受体，主要表达在活化的T细胞上，PD-1／B7-H1途径在抑制T细胞增殖的同时，也影响很多细胞因子的分泌。同时，B7-H1在肿瘤细胞上的高表达，能减弱机体抗肿瘤免疫应答的作用，可能与肿瘤的免疫逃避机制密切相关，阻断此途径可增强抗肿瘤免疫应答，大量研究显示B7-H1在机体免疫应答的调控方面发挥着重要的作用，B7-H1可能会成为肿瘤治疗中新的靶分子。更为重要的是，目前B7-H1对T细胞的生物学作用不同的研究小组报道了截然不同的结果，一些研究表明，B7-H1还能作用T细胞促进其显著增殖和IL-2的分泌，具体机制尚不明了。 本课题研究利用RT-PCR方法成功地克隆了人B7-H1基因，测序正确后，将其装入逆转录病毒载体pGEZ-Term，构建了重组逆转录病毒载体pGEZ-Term／B7-H1，在此基础上，将重组载体转染对数生长期的293T细胞，进行病毒颗粒的包装，收获293T细胞培养上清，用其中所含的病毒反复感染鼠成纤维细胞株L929，经Zeocin多次筛选获得能稳定高表达B7-H1分子的基因转染细胞株L929／B7-H1。RT-PCR检测能扩增出特异性目的基因，表明该重组载体已经较好地整合进真核细胞的基因组中，同时流式细胞仪分析结果表明，载体中携带的绿色荧光蛋白报告基因（GFP）在细胞中获得了95％以上较高的表达，用鼠抗人B7-H1直标单抗检测显示，人B7-H1
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