重组人P53腺病毒基因经介入治疗肝癌实验研究

论文摘要

第一部分兔VX2移植性肝癌模型的建立及经介入途径重组人P53腺病毒基因的表达目的探讨兔VX2移植性肝癌模型的建立及重组人P53腺病毒基因（rAd-p53 ,1X1012VP/支）经介入途径在兔VX2移植性肝癌模型中的表达特点。材料与方法将60只新西兰大白兔采用移植法建立兔VX2移植性肝癌模型,于移植术11天行磁共振（MRI）、CT检查,计算其体积（V1）。随机抽取27只移植成功的荷瘤兔,平均分成三组:A组:经肝动脉单纯灌注rAd-p53（5X106 VP）;B组:rAd-p53（5X106 VP）+超液态碘油0.5ml/只经肝动脉灌注;C组:瘤内rAd-p53（5X106 VP）直接导入。所有荷瘤兔术中均行DSA摄影。介入术后24h、72h、6天分别处死实验兔,通过免疫组织化学方法检测肿瘤组织及瘤周P53和Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果所有60只大白兔经MRI及CT检查证实有57只种瘤成功,成功率95%。兔VX2移植性肝癌模型CT平扫呈低密度或等密度影;MRI扫描TW1表现为低信号,TW2表现为高信号,信号均匀,边界清楚;DSA显示瘤灶血供主要来自于肝动脉,为富血管性,可见肿瘤染色。检测到A组P53蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为19.65±5.29, 62.43±3.27, 18.73±3.45;B组P53蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为20.28±4.34, 65.43±2.13 ,19.63±4.23;C组P53蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为26.53±6.07,70.36±3.43 ,26.36±4.35。A组Bax蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为8.56±1.27 ,35.75±1.35 ,9.84±2.46;B组Bax蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为11.32±2.13 ,37.63±2.46,10.34±2.13;C组Bax蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为17.64±2.25 ,43.76±2.19 ,16.89±1.67。A组Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为30.43±3.06 ,18.03±4.36 ,29.65±4.32;B组Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为28.36±2.25 ,16.21±3.17 ,27.70±3.39;C组Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为24.27±4.37 ,12.07±2.64 ,23.84±2.51。P53和Bax蛋白的表达呈与时间相关性正态分布,以C组表达最高,Bcl-2蛋白表达随P53蛋白表达的增多而减少。结论兔VX2移植性肝癌模型影像学特点与人肝癌相似,可用于肝癌的实验研究;P53蛋白在兔VX2肝癌模型中的表达呈正态分布,Bax、Bcl-2蛋白的表达与P53蛋白表达相关;不同的rAd-p53介入导入方式P53、Bax、Bcl-2蛋白表达不同,以瘤内及瘤周直接注射方式表达最高,与超液态碘油混合灌注及单纯肝动脉灌注次之。第二部分重组人P53腺病毒基因经介入途径治疗兔VX2移植性肝癌模型实验研究目的观察重组人P53腺病毒基因经不同介入导入方式对兔VX2移植性肝癌模型治疗效果。材料与方法采用第一部分成功建立的30只兔VX2移植性肝癌模型,介入术14天分别行CT、MRI检查,计算其体积（V2）,对其生长率进行比较,所有荷瘤兔术中均行DSA摄影。随机分成五组,A组:经肝动脉灌注生理盐水0.5ml;B组:经肝动脉灌注超液态碘油0.5ml/只行栓塞治疗;C组:经肝动脉单纯灌注rAd-p53（5X106 VP）;D组:rAd-p53（5X106 VP）+超液态碘油0.5ml/只经肝动脉灌注;E组:瘤内rAd-p53（5X106 VP）直接导入。介入术后2周处死实验兔,先行大体病理观察,再分别通过免疫组织化学方法检测肿瘤细胞凋亡、血管内皮因子（VEGF）及Von-Willebrand-factor（VIII因子）表达情况,对VIII因子阳性血管内皮细胞进行微血管（MVD）计数,并结合其病理特征进行分析。结果各组治疗前肿瘤体积无显著性差异（P>0.05）,治疗后肿瘤体积及肿瘤增长率比较均不相同,两两比较分析显示,任意两组间比较均有显著性差异（p<0.05）,C、D、E组较A、B组增长率低,C、D、E组组间有显著性差异（p<0.05）,以D组为低,说明B、C、D、E组有显著抑制肿瘤生长作用,以D组最为明显。各组间肝表面转移灶及显微镜下瘤周0.5cm肝组织转移灶不完全相同,两两比较结果示B组较A、C组低（P〈0.05）,而B、D组间无显著性差异（P>0.05）,E组较C、D组高（P〈0.05）,D组较E组低（P〈0.05）。五组肿瘤细胞平均凋亡率分别12.06%、14.56%、17.65%、18.69%、19.65%,经统计学分析C、D、E组较A、B组高（P<0.05）,C、D组较E组低（P<0.05）。五组VEGF阳性率分别为50.0%、83.3%、83.3%、50.0%、50.0%,统计分析B组较A组高（P<0.05）,D、C、E三组间有显著性差异（P<0.05）,D和E组间无显著性差异（P>0.05）;五组间MVD不完全相同,分别为81.62±16.13、85.23±24.34、75.20±23.91、71.16±21.34、72.34±25.29 ,统计学分析B组较A组高（P<0.05）,B组较D、C、E组高（P<0.05）,D、C、E三组中以D组最高（P<0.05）,D和E组间无显著性差异（P>0.05）;MVD与VEGF之间存在较好的相关性。结论经介入途径导入重组人P53腺病毒基因能安全高效促进兔VX2肝癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成进而抑制肝癌细胞复发转移;不同的rAd-p53介入导入方式对肝癌治疗效果不同,以与常规介入治疗联合灌注最为有效,瘤内及瘤周直接注射方式次之,单纯肝动脉灌注稍差。

论文目录

• 中英文缩写词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 兔VX2 移植性肝癌模型的建立及经介入途径导入重组人P53腺病毒基因在模型中的表达
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 附图
• 第二部分 重组人P53 腺病毒基因经介入途径治疗兔VX2 移植性肝癌模型实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 附图
• 综述 P53 基因与肝癌基因治疗
• 参考文献
• 附录 攻读硕士期间发表论文目录
• 致谢