戊肝病毒基因ORF2片段在大肠杆菌中的表达

论文摘要

本实验主要研究戊肝抗原蛋白基因在大肠杆菌中优化表达的方法，以期获得具有免疫原性的戊肝抗原蛋白，为戊肝基因工程疫苗的研究奠定基础。 首先采用氯化钙法将克隆有戊肝抗原蛋白基因的质粒载体pTO-T7-E转化导入大肠杆菌BL21（DE3）中。对经卡那霉素抗性筛选出的单克隆菌落扩增培养后，提取质粒，通过酶切和PCR法进行鉴定，确定转化菌。然后分别在25℃、30℃、37℃条件下对筛选出的转化菌培养，以1mmol／L IPTG诱导表达，超声裂解菌体，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的蛋白，蛋白印迹分析目的蛋白的免疫原性。 实验结果表明：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示：在37℃条件下经IPTG诱导的菌体中可见分子量约21KDa的重组蛋白，与理论值相符。表达产物主要以包涵体形式存在于胞内。蛋白印迹分析表明：该目的蛋白具有免疫原性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 戊肝疫苗的研究进展
• 1.3 本论文研究的主要内容及意义
• 第二章 相关的实验理论
• 2.1 原核细胞的DNA转录
• 2.2 原核生物的蛋白质合成
• 2.3 原核生物的基因表达调控
• 2.4 大肠杆菌表达系统
• 第三章 实验部分
• 实验一 目的基因的转化
• 3.1.1 仪器与材料
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.3 结果
• 3.1.4 讨论
• 实验二 目的基因的诱导表达
• 3.2.1 仪器与材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 结果
• 3.2.4 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献