论文题目: 自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中作用及其机制的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物医学工程
作者: 杨志刚
导师: 曾耀英
关键词: 杀伤细胞,天然,分离,骨髓移植,同种异基因反应性,移植物抗宿主病,移植物抗肿瘤
文献来源: 暨南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前根治白血病的唯一有效手段,但仍然存在如移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥和免疫重建等移植相关障碍,尤其是如何在防止GVHD的同时诱导足够强的移植物抗白血病(GVL)作用,是目前临床aUo-HSCT中亟待解决的难题。本研究针对这些影响allo-HSCT疗效的关键问题立题,建立NK细胞体外分离和培养扩增的方法和小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)模型,研究NK细胞在allo-HSCT中的移植免疫和抗肿瘤免疫效应及机制。实验结果证实,在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞有效抑制GVHD和移植排斥,提高造血干细胞植入水平,促进造血、免疫重建并显著提高受者的生存率;并发现同种异基因反应性NK细胞对小鼠B16-F1肿瘤细胞具有明显的移植物抗肿瘤(GVT)作用。实验结果与临床alIo-HSCT中亟需攻克的关键障碍紧密相关,不仅对NK细胞效应机制的研究具有重要的理论意义,而且对NK细胞应用于allo-HSCT和治疗异基因肿瘤的临床实践有重要的指导作用。俘舍攀悦论文:.移带价细砚在刁、双异玉因开倪移祖中作用及其机侧的研究中大摘界效靶细胞25:1时杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%、83.86%,明显高于脾MNC(41.01%)。MACS法纯化前后细胞总数和CD3一NKI.1+细胞百分率分别为l.oxl08、l.sxlo‘和2.54%、93.60%;但纯化后细胞在体外培养20d只扩增到1.9xl扩。结论:用两步猫附分离法扩增并分离小鼠NK细胞,2~3周内可获得大量NK细胞,纯度达55%~60%;效靶细胞为25:1时对YAC一1细胞的杀伤率约为80%。 第二章小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立 目的:建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病(GVHD)模型;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法:以近交系的c57BL/6(H-Zb小鼠为供鼠、BALB/c似一2勺小鼠为受鼠进行异基因骨髓移植,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果:单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD,20Ok的小鼠长期存活(超过120天),无急性GVHD表现;混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓细胞4xlo“与外周淋巴细胞1:1混合组小鼠全部在移植后5~14天出现典型的弓背体位,存活期6~24天,临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论:以供鼠骨髓细胞4、106与外周淋巴细胞1:1混合进行的异基因骨髓移植,100%引出致死性的急性GVHD。第三章NK细胞对小鼠异基因骨髓移植中GVHD效应的影响 目的:研究自然杀伤仍服)细胞在异基因骨髓移植(all。一BMT)中对移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法:以近交系小鼠c57BL/6(H一Zb为供鼠、BALB/c(H-Zd)为受鼠进行allo-BMT,在allo-BMT同时输入不同数量的供鼠外周T细胞和(或)NK细胞,根据临床表现和病理检查判断GVHD程度,并比较不同移植组的存活率和GVHD发生情况。结果:输注lxl06供鼠NK细胞的移植组40%小鼠出现GV}ID,输注2 x 106供鼠NK细胞的移植组仅30%出现GVHD,输注NK细胞的两组分别与异基因骨髓移植组(80%急性GVHD、20%慢性GVHD)和骨髓+T细胞组(100%急性GvHD)比较,GVHD发生率显著下降、程度明显减轻;长俘士拳悦论文:.落杀价翻硬在小双葬王因.从移植甲他用及其祝侧的研充甲文摘葬期存活(超过120天)率在输注高浓度NK细胞组为80%,输注低浓度NK细胞组为70%,均较异基因骨髓移植组(20%)和骨髓+T细胞组(0 .0%)显著增高伊<0.01)。结论:在小鼠all。一BMT中,同种异基因反应性NK细胞可抑制GvHD效应,延长存活期。第四章NK细胞在小鼠异基因骨髓移植模型中抗肿瘤作用的研究 目的:利用小鼠异基因骨髓移植(all。一BM叮)模型,研究同种异基因反应性NK细胞对B 16-FI和S一180肿瘤细胞成瘤小鼠的移植物抗肿瘤(GvT)作用。方法:用B16一Fl和s一180细胞株分别在近交系的c57BL/6(H一Zb和BALB/c(H一2与小鼠建立肿瘤模型。以接受致死量全身照射(,D的荷瘤小鼠为受鼠,分别以BALBlc件2与和c57B珑似一扔小鼠为供鼠进行allo-BMT,并在all。一B研后输注供鼠外周T细胞或NK细胞治疗肿瘤,比较不同组的成瘤情况、抑瘤率和20天存活率,并根据临床表现、白细胞计数和病理检查判断受鼠是否死于GVHD或骨髓造血功能衰竭。结果:对S一180细胞成瘤受鼠,各组的抑瘤率和加天存活率无差异,全部受鼠在移植后17天内死亡;其中T细胞治疗组小鼠有急性GVHD表现。对B16-FI细胞成瘤受鼠,NK细胞治疗组的抑瘤率(71.05%)和20天存活率(100%)显著高于单纯骨髓移植组(46.58%和50%),NK细胞治疗组和单纯骨髓移植组的20天存活率均高于不接受扭I和aU。一BMT的生物对照组0.0%),且无GVHD表现;而T细胞治疗组小鼠全部移植十9~十15死于急性GVHD。结论:在小鼠ail小BMT中,同种异基因反应性NK细胞对B16一Fl肿瘤细胞有显著GVT作用而且不引起GVHD效应,可以延长荷瘤受鼠的生存期;对S一180肿瘤细胞,同种异基因反应性NK细胞无GVT作用。 第五章NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥 和造血及免疫重建的影响 目的:研究自然杀伤价服)细胞在小鼠异基因骨髓移植(a no一BMT)中?
论文目录:
缩略词
中文摘要
英文摘要
绪论
第一章 小鼠NK细胞的体外培养扩增与初步分离
材料和方法
结果
讨论
参考文献
附图
第二章 小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立
材料和方法
结果
讨论
参考文献
图版
第三章 NK细胞对小鼠异基因骨髓移植中GVHD效应的影响
材料和方法
结果
讨论
参考文献
附图
第四章 NK细胞在小鼠异基因骨髓移植模型中抗肿瘤作用的研究
材料和方法
结果
讨论
参考文献
图版
第五章 NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响
材料和方法
结果
讨论
参考文献
图版
结论与建议
在学期间发表论文
致谢
发布时间: 2005-04-30
参考文献
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