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β-内酰胺类抗生素对铜绿假单胞菌耐药性及适应性的影响

2020-12-11阅读(786)

β-内酰胺类抗生素对铜绿假单胞菌耐药性及适应性的影响

论文摘要

1目的分析汕头大学医学院第一附属医院临床分离的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa）对常用抗菌药物的耐药性;探讨β-内酰胺类抗生素对铜绿假单胞菌AmpC酶、毒力及适应性的表达的影响。2方法2.1对汕头大学医学院第一附属医院检验科2005-2009年间从各种送检标本中分离的铜绿假单胞菌的耐药性进行回顾性分析。2.2收集同一患者经抗生素治疗前后临床分离的铜绿假单胞菌菌株,采用微量肉汤稀释法测定其对11种常用抗生素的最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC）,以随机扩增多态性DNA（Random amplified polymorphic DNA,RAPD）方法对其进行基因分型,从而筛选出同一患者经抗生素治疗后的分离菌株对四种常用β-内酰胺类抗生素（头孢他啶/头孢吡肟/亚胺培南/美罗培南）的MIC值大于或等于治疗前分离菌株MIC值的8倍的同源性菌株。2.3对2.2中筛选出的菌株,采用头孢西丁三维确证实验和头孢西丁诱导实验检测其AmpC酶的产生情况。2.4对2.2中筛选出的菌株,检测其经抗生素治疗前后胞外粘多糖、弹性蛋白酶、蛋白水解酶、LasA蛋白及生物被膜表达的变化。采用生长率测定法和体外竞争性实验法检测其适应性的变化。3结果3.1 2005-2009年间,我院临床分离的铜绿假单胞菌对11种常用抗生素的耐药率处于一个较高水平（30%-90%）,其中头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率显著上升;亚胺培南、庆大霉素、左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率显著下降,其余抗生素的耐药率无明显差异。临床标本中多重耐药铜绿假单胞菌（Multiresistant P. aeruginosa, MDRPA）的分离率呈波动性下降。11种抗生素中头孢哌酮/舒巴坦的耐药率（27.1%）最低,其次是头孢他啶（44.9%）;敏感率最高的是哌拉西林/他唑巴坦（45.5%）,其次是阿米卡星（40.3%）。3.2 145对菌株中共筛出11对菌株,其抗生素治疗前后均为同源性菌株且治疗后分离株对四种常用β-内酰胺类抗生素（头孢他啶/头孢吡肟/亚胺培南/美罗培南）的MIC值大于或等于治疗前分离株MIC值的8倍,11对菌株均为不同克隆来源的菌株。该类菌株占所收集总菌株的7.85%。3.3抗生素治疗前分离菌株多为（81.8%）产诱导型AmpC酶菌株,抗生素治疗后,菌株对β-内酰胺类抗生素（头孢他啶/头孢吡肟/亚胺培南/美罗培南）的MIC值明显增高,大部分菌株（77.8%）变成持续高产AmpC酶菌株。3.4抗生素治疗后菌株与抗生素治疗前同源菌株相比,生长率、胞外粘多糖产量及弹性蛋白酶活性均明显降低（p <0.05）,而蛋白水解酶活性、LasA蛋白活性及生物被膜形成量无显著性差异（p >0.05）。体外竞争实验结果显示,72.7%的菌株治疗后较治疗前适应性显著降低（p <0.01）。4结论4.1铜绿假单胞菌耐药形势严峻。哌拉西林/他唑巴坦可作为治疗急重症铜绿假单胞菌感染的首选药,但应严格控制其使用范围。合理应用抗生素和严格控制患者间的交叉感染可有效控制铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药率,降低多重耐药铜绿假单胞菌的分离率。4.2经β-内酰胺类抗生素治疗后,大部分铜绿假单胞菌菌株不会引起耐药,仅少部分菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药水平显著增加,从而引起治疗的失败。4.3临床治疗产高诱导型AmpC酶铜绿假单胞菌引起的感染时,要避免使用对AmpC酶有诱导作用的β-内酰胺类抗生素。4.4经β-内酰胺类抗生素治疗后耐药性明显增加的铜绿假单胞菌较其治疗前同源菌株,其适应性降低,与细菌侵袭性相关毒力因子的表达降低,但与细菌定植相关毒力因子的表达能力并未受损。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略词表
  • 第1章 前言
  • 第2章 铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性分析
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 菌株来源
  • 2.1.2 试剂和仪器设备
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 标本的分离培养
  • 2.2.2 鉴定
  • 2.2.3 普通肉汤的制备
  • 2.2.4 MH平板的制备
  • 2.2.5 纸片扩散K-B法
  • 2.3 结果
  • 2.3.1 铜绿假单胞菌临床分离株的主要来源
  • 2.3.2 铜绿假单胞菌临床分离株对常用抗生素的耐药性分析
  • 2.3.3 多重耐药铜绿假单胞菌（Multidrug resistant P. aeruginosa ，MDRPA）的临床分离率
  • 2.4 讨论
  • 第3章 AmpC酶介导的铜绿假单胞菌耐药性分析
  • 3.1 材料
  • 3.1.1 菌株来源
  • 3.1.2 实验仪器及试剂
  • 3.2 实验方法
  • 3.2.1 试剂配制
  • 3.2.2 细菌复苏和培养
  • 3.2.3 纸片扩散K-B法
  • 3.2.4 细菌基因组DNA提取
  • 3.2.5 细菌随机扩增多态性DNA（Random amplified polymorphic DNA, RAPD）分型
  • 3.2.6 琼脂糖凝胶电泳
  • 3.2.7 最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC）值测定
  • 3.2.8 酶提取
  • 3.2.9 AmpC 酶测定
  • 3.3 实验结果
  • 3.3.1 RAPD分型
  • 3.3.2 MIC
  • 3.3.3 AmpC酶初筛实验、头孢西丁诱导实验和头孢西丁三维确证实验
  • 3.4 讨论
  • 第4章 β-内酰胺类抗生素对铜绿假单胞菌毒力及适应性的影响
  • 4.1 材料
  • 4.1.1 菌株来源
  • 4.2 实验仪器及试剂
  • 4.2.1 实验仪器
  • 4.2.2 试剂
  • 4.3 实验方法
  • 4.3.1 PBS的配制
  • 4.3.2 10%三氯乙酸配制
  • 4.3.3 1M Tris-Hcl的配制
  • 4.3.4 1%的龙胆紫溶液配制
  • 4.3.5 2%乙酸配制
  • 4.3.6 刚果红溶液配制
  • 4.3.7 蛋白水解酶标准品配制
  • 4.3.8 弹性蛋白酶标准品配制
  • 4.3.9 10mg/mL弹性蛋白刚果红溶液配制
  • 4.3.10 10m M磷酸氢二钠溶液配制
  • 4.3.11 体外竞争实验
  • 4.3.12 生长率的测定
  • 4.3.13 胞外粘多糖的测定
  • 4.3.14 蛋白水解酶活性测定
  • 4.3.15 弹性蛋白酶活性测定
  • 4.3.16 生物被膜测定
  • 4.3.17 LasA蛋白活性测定
  • 4.4 统计学方法
  • 4.5 结果
  • 4.5.1 体外竞争实验
  • 4.5.2 生长率测定
  • 4.5.3 胞外粘多糖测定
  • 4.5.4 蛋白水解酶活性、弹性蛋白酶活性、生物被膜及LasA蛋白活性
  • 4.6 讨论
  • 第5章 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 参考文献
  • 致谢
  • 硕士研究生期间发表论文及学术活动
  • 个人简历表

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