论文摘要
目的:研究从生殖支原体（Mg）提取的脂质相关膜蛋白（LAMPs）在体外诱导人单核细胞（THP-1）表达TNF-α、IL-1β与IL-6及其mRNA的表达水平,研究该膜蛋白能否激活THP-1细胞中核因子kappa B（NF-κB）及诱导细胞产生凋亡的情况,以便了解Mg潜在的致病性,为进一步探讨Mg LAMPs诱导单核细胞表达前炎症性细胞因子及诱导单核细胞产生凋亡的分子机制提供实验依据。方法:用Mg提取的LAMPs刺激THP-1细胞,分别用ELISA法和RT-PCR方法分析TNF-α、IL-1β与IL-6的产生和其mRNA的表达;采用凝胶电泳迁移率检测（EMSA）方法检测NF-κB的激活,并分析NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对Mg LAMPs处理的THP-1细胞产生TNF-α、IL-1β与IL-6的量和其mRNA的表达及对细胞凋亡的影响。不同实验组的细胞用丫啶橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色法及AnnexinV-FITC-PI染色法检测细胞凋亡。结果:Mg LAMPs能以时间和剂量依赖方式刺激THP-1细胞产生TNF-α、IL-1β与IL-6,;当LAMPs的浓度为3μg/mL时产生的TNF-α、IL-1β与IL-6量最多,浓度分别为（1885.29±58.62）pg/mL、（256.20±2.03）pg/mL、（35.29±0.49）pg/mL;但当LAMPs从3μg/mL增加到5μg/mL时,TNF-α、IL-1β与IL-6产生的量反而减少。另外当LAMPs刺激细胞6h后即可从培养基中检测到TNF-α、IL-1β与IL-6,而刺激12h后产生的量则达到高峰。在用该膜蛋白与NF-κB的抑制剂PDTC共同处理THP-1细胞后,TNF-α、IL-1β与IL-6及其mRNA表达水平能被抑制。Mg LAMPs处理THP-1细胞1h后,其细胞浆内的NF-κB即被激活,使其从细胞浆中转位到细胞核内。Mg LAMPs可诱导THP-1细胞发生凋亡,且PDTC能抑制LAMPs诱导THP-1细胞发生凋亡。结论:1. Mg LAMPs能诱导THP-1细胞产生TNF-α、IL-1β与IL-6及凋亡;2. Mg LAMPs能激活NF-κB;3. Mg LAMPs诱导THP-1细胞表达前炎症细胞因子和细胞凋亡与NF-κB的活化相关;