论文题目: 醋酸棉酚诱导小鼠前列腺癌RM-1细胞凋亡的研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 泌尿外科学
作者: 马杰
导师: 曹承华
关键词: 细胞凋亡,醋酸棉酚,细胞株,蛋白,基因
文献来源: 同济大学
发表年度: 2005
论文摘要: 前列腺癌在西方国家是男性常见病，在引起死亡的原因中仅次于肺癌。随着生活水平的提高和寿命的延长，我国前列腺癌目前呈快速上升趋势，估计在不久的将来将成为我国男性常见病。前列腺癌缺乏特异性临床症状，并易与前列腺增生症、前列腺炎等疾病混淆，40％—50％的前列腺癌病人确诊已属晚期，不宜行根治性手术，前列腺癌有雄激素依赖性和雄激素非依赖性两种前列腺癌细胞，雄激素依赖性前列腺癌在去除雄激素之后，发生细胞凋亡，因此睾丸切除（或药物去势）+抗雄激素治疗是治疗中晚期前列腺癌的主要方法之一。雄激素非依赖性前列腺癌在去势后不发生细胞凋亡，目前对该型前列腺癌缺乏特异的治疗方法。棉酚是存在于棉籽中的一类物质，其抗男子生育作用是我国学者首先发现，它的抗生育作用在临床及基础的研究达40余年。研究表明，在体内和体外，棉酚可抑制多种癌细胞的增殖。棉酚可抑制人类雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3的生长，其抑制作用通过流式细胞仪监测，监测表明，棉酚使得PC3细胞停滞在G0／G1期，而不向S期和G2／M期转化，这种抑制作用呈时间和剂量依赖性。而且，棉酚在抑制PC3细胞DNA合成、使其停滞在G0／G1期的同时，影响TGF-β1基因的表达。这就是说，TGF-β1可能介导棉酚对PC3细胞的抑制作用。棉酚对前列腺癌细胞增殖和转移的抑制作用也有报道。CHANG CJ等研究两个月龄的Copenhagen雄大鼠模型，皮下注射高转移性、雄激素非依赖型前列腺癌细胞系MAT-LyLu Dunning。经棉酚治疗两周以后，MAT-LyLu前列腺癌肿块和前列腺的重量分别减少了24％（p＜0.05）和31％（p＜0.05），而睾丸和附睾的重量没有明显变化。棉酚处理的大鼠只有20％发现有淋巴结或肺脏转移，而对照组大鼠，肺脏转移为60％，淋巴结转移为40％。因此，棉酚对MAT-LyLu前列腺癌细胞具有抑制增殖和抑制转移的作用，可用棉酚治疗雄激素非依赖性前列腺癌。棉酚还影响人类前列腺癌细胞O2的消耗和CO2的产生，机制可能是因为扰乱了线粒体琥珀酸的氧化磷酸化过程。醋酸棉酚具有降低睾丸内雄激素水平的作用，常规剂量副作用仅有低钾，发生率约1％，口服补钾后即可缓解。最近研究发现棉酚具有诱导前列腺癌细胞MAT-lylu、白血病细胞系HL-60凋亡的作用，C-MyC，C-jun，C-fos等均有重要作用。bax基因是细胞凋亡的重要调控基因，它表达过程中各个环节的变化直接影响细胞凋亡的全过程。本课题目的是研究醋酸棉酚诱导前列腺癌RM-1细胞凋亡状况及在此过程中bax基因表达的变化，以完善醋酸棉酚抗癌机制的研究，为临床使用醋酸棉酚治疗前列腺癌提供实验数据。本实验采用MTT法检测各不同浓度棉酚对RM-1细胞的抑制情况，测得RM-1细胞半数抑制时棉酚的浓度为30.56mg／L，确定最佳干预浓度为30mg／L，在此浓度下分别采用透射电镜、Hoechst33258荧光染色法，观察棉酚诱导小鼠RM-1前列腺癌细胞凋亡的情况；采用流式细胞仪检测棉酚诱导RM-1细胞凋亡时各不同时期的凋亡率及Bax蛋白表达量，RT-PCR检测棉酚诱导该细胞凋亡时bax基因mRNA水平的变化。电子显微镜、Hoechst33258荧光染色法，在30mg／L棉酚作用下，各时段均能观察到典型的细胞凋亡情况，即显示细胞缩小、包膜皱缩、表面微绒毛消失、核固缩、沿核膜分布、核碎裂等显著的形态学改变；流式细胞仪分析，可见典型G1峰出现；随着药物作用时间延长，凋亡率增加Bax蛋白表达也有明显增加，两者有明显相关性，RT-PCR显示bax基因mRNA水平也有明显上调。本研究提示诱导RM-1细胞凋亡是棉酚抗肿瘤的重要机制，并且影响bax基因表达可能是其重要路径，可通过干预其表达，增强诱导凋亡作用达到治疗肿瘤的目的。
论文目录:
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 试剂
2.1.3 引物
2.1.4 试剂的配制
2.1.5 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 实验分组
2.2.3 MTT法测定IC_(50)值
2.2.4 形态学观察
2.2.5 流式细胞仪检测细胞DNA倍体及细胞增殖周期
2.2.6 流式细胞仪检测细胞Bax蛋白表达水平
2.2.7 RT-PCR检测bax基因mRNA水平
2.2.8 统计学处理
第3章 结果
3.1 RM-1细胞增殖的抑制率及IC_(50)值
3.2 透射电镜观察
3.3 Hoechst33258荧光染色观察
3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期
3.5 流式细胞仪检测细胞Bax蛋白表达水平
3.6 药物干预后Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率的相关性
3.7 RT-PCR检测bax基因mRNA水平
第4章 讨论
4.1 醋酸棉酚诱导RM-1细胞凋亡
4.2 醋酸棉酚诱导RM-1细胞凋亡与bax基因
第5章 结束语
致谢
参考文献
附录
附录 A
附录 B
个人简历 在读期间发表的学术论文与研究结果
发布时间: 2007-12-28
参考文献
- [1].20（S）-原人参二醇对小鼠前列腺癌RM-1细胞体外作用的实验研究[D]. 李德龙.吉林大学2009
- [2].20（S）-原人参二醇对小鼠前列腺癌RM-1细胞移植瘤的治疗作用[D]. 郭亚雄.吉林大学2009
- [3].前列腺癌患者血清铜、锌变化及锌对RM-1细胞MMPs表达的影响[D]. 邹晓华.吉林大学2007
- [4].DAPT抑制Notch信号通路对前列腺癌骨转移瘤RM-1细胞增殖、凋亡及化疗敏感性影响的研究[D]. 吴涛华.福建医科大学2012
- [5].棉酚对人宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响及机制研究[D]. 田丹.南方医科大学2009
- [6].肌氨酸—前列腺癌新型标志物及诊断阈值范围探索[D]. 陈梅.上海大学2017
- [7].去势抵抗型前列腺癌的治疗进展[D]. 熊斌.重庆医科大学2014
- [8].Hsa-miR-19b-1-5p在前列腺癌中的作用及其机制的研究[D]. 黄振.青岛大学2017
- [9].尿液外泌体miRNAs对前列腺癌的诊断价值[D]. 李腊秀.第四军医大学2017
- [10].前列腺癌临床患病因素及相关蛋白表达的研究[D]. 刘家赵.宁夏医科大学2015
相关论文
- [1].棉酚对人宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响及机制研究[D]. 田丹.南方医科大学2009
- [2].低剂量棉酚与甾体激素联合用药对大鼠睾丸iNOS和OPN蛋白表达的影响[D]. 张成侠.中国协和医科大学2009
- [3].棉酚对人鼻咽癌细胞增殖与凋亡的影响及作用机制初探[D]. 梁璐.南方医科大学2008
- [4].棉酚对Jurkat T细胞和小鼠淋巴细胞的免疫药理作用及其机制研究[D]. 许文彬.暨南大学2009
- [5].醋酸棉酚宫内给药治疗子宫腺肌病的实验研究[D]. 裘琳.浙江大学2008
- [6].醋酸棉酚阴道给药治疗子宫内膜异位症的实验研究[D]. 周琴琴.浙江大学2008
- [7].棉酚衍生物的合成及其生物活性研究[D]. 黄丽亚.广西大学2007
- [8].醋酸棉酚对小鼠精母细胞中染色体配对行为的影响[D]. 代小华.河南大学2005
- [9].醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞凋亡影响的研究[D]. 龙安梅.湖南农业大学2006
- [10].醋酸棉酚的制备研究[D]. 余虹宇.湖南大学2001