灵芝多糖及其海洋复方制剂的研究

论文摘要

慢性疾病以患病率高、死亡率高而危害人们健康和影响生活质量。随着人民生活水平的提高和生活方式的改变,高血压、糖尿病、心脑血管疾病等慢性疾病呈现快速攀升趋势,一些慢性病已显示出低龄化的趋势,由此带来高额医疗费用成为个人、家庭及社会的沉重负担。大量研究发现,许多疾病的发生均与自由基的损伤及免疫功能低下有关。医学上认为,人体自身的免疫系统紊乱是慢性病形成的根本原因。因此,从根本上提高人体免疫力是摆脱慢性病的有效手段。寻找具有更好免疫调节作用的药物或功能制品已成为当今研究的热点。近年来植物多糖类由于无毒副作用、具有抗氧化、调节免疫、多效性、双向调节性等特点,成为开发免疫增强剂中的一个研究热点。多糖的免疫调节有细胞、体液及非特异免疫等多个靶点,而一种多糖仅对部分靶点有明显作用。提示作用靶点不同的几种多糖以适宜比例组合后可能产生协同、增效作用,从而具有更优的免疫活性。基于以上原因,本论文将具有免疫活性的海洋低聚甘露糖醛酸与灵芝多糖配伍得到海洋复方多糖,对其增强免疫作用进行研究。本论文首先对灵芝多糖进行系统地研究。采用复合酶法提取灵芝多糖,优化其最佳提取工艺;对提取的灵芝粗多糖进行超滤分级,并评价其清除DPPH自由基活性;选择抗氧化活性最好的GLU-1作为海洋复方多糖配伍原料;对超滤分级产物进行纯化,得到不同分子量的灵芝多糖组分,体外抗氧化活性实验表明,GLP-7、5、6的抗氧化活性最好;利用UV、IR、NMR对抗氧化活性组分GLP-5的结构进行初步的研究。另一方面,本文对褐藻胶M段和G段进行抗氧化活性筛选;进而选择抗氧化活性较好的M段进行Fenton降解,得到不同分子量的低聚甘露糖醛酸;再次进行抗氧化活性筛选,得到活性最好的M3000,作为海洋复方多糖配伍原料。将GLU-1与M3000进行配伍,得到海洋复方多糖。评价了GLU-1、M3000以及二者所组成的海洋复方多糖GLU-1+M3000（1:1）清除三种自由基作用。由结果可知GLU-1、M3000以及海洋复方多糖对DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基均具有明显的清除作用,清除率按下列顺序排列:GLU-1+M3000（1:1）>M3000> GLU-1。即GLU-1与M3000通过配伍,提高了自由基清除能力,得到了抗氧化活性较好的海洋复方多糖,为其进一步研究奠定了基础。同时,评价了GLU-1、M3000以及二者所组成的海洋复方多糖的免疫增强作用。结果表明,与空白对照组相比,复方多糖可显著提高小鼠脏器指数（P<0.01）、显著提高血清溶血素值（P<0.01）、能够显著增强小鼠的DTH（P<0.01）、对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有显著的促进作用（P<0.01）。复方组在各实验中均效果显著,与M3000组相比具有显著的差异。说明低聚甘露糖醛酸经过与灵芝多糖配伍,提高了其免疫增强作用。与灵芝多糖组相比,复方组免疫增强作用虽然没有显著性差异,但也有所提高。表明海洋复方多糖显示出较好的增强小鼠免疫力的作用,为免疫增强药物或功能制品的进一步开发提供了理论依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1.研究背景
• 2.立题依据
• 3. 灵芝多糖的研究现状
• 3.1 灵芝多糖的结构研究现状
• 3.2 灵芝多糖的生物活性
• 3.2.1 抗氧化、抗衰老作用
• 3.2.2 免疫调节
• 3.2.3 抗肿瘤活性
• 3.2.4 降血糖、降血脂作用
• 3.2.5 其他作用
• 3.3 灵芝多糖的发展与展望
• 4.海洋活性多糖褐藻胶的研究进展
• 4.1 抗氧化活性
• 4.2 免疫调节作用
• 4.3 抗肿瘤作用
• 4.4 抗凝血作用
• 4.5 促生长作用
• 5. 研究目的及意义
• 第一部分 灵芝多糖的提取纯化及体外抗氧化作用的研究
• 第一章 复合酶法提取灵芝粗多糖工艺的研究
• 1.1 复合酶法提取工艺的优化
• 1.1.1 材料与仪器
• 1.1.2 实验方法
• 1.1.2.1 灵芝多糖的提取工艺流程
• 1.1.2.2 葡萄糖标准曲线
• 1.1.2.3 灵芝多糖的多糖提取量（以葡萄糖计）测定
• 1.1.2.4 单因素实验
• 1.1.2.5 复合酶用量配比的正交实验
• 1.1.2.6 复合酶最佳酶解条件的正交实验
• 1.1.3 结果与讨论
• 1.2 灵芝粗多糖（GLU）的提取及理化性质测定
• 1.2.1 材料与仪器
• 1.2.2 实验方法
• 1.2.2.1 灵芝粗多糖的大提取
• 1.2.2.2 分子量分布的测定
• 1.2.2.3 单糖组成分析
• 1.2.2.4 总糖含量的测定
• 1.2.2.5 糖醛酸含量的测定（硫酸-咔唑法）
• 1.2.2.6 蛋白含量的测定
• 1.2.3 结果与讨论
• 1.3 灵芝粗多糖（GLU）对DPPH自由基的清除作用
• 本章小结
• 第二章 灵芝多糖超滤分级产物的制备
• 2.1 灵芝粗多糖GLU 的超滤分级
• 2.1.1 材料与仪器
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.3 结果与讨论
• GLU‐3 理化性质的测定'>2.2 分级产物GLU‐1^GLU‐3 理化性质的测定
• 2.2.1 材料与仪器
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.3 实验结果与讨论
• GLU‐3 对DPPH 自由基的清除作用'>2.3 分级产物GLU‐1^GLU‐3 对DPPH 自由基的清除作用
• 2.3.1 材料与仪器
• 2.3.2 实验方法
• 2.3.3 结果与讨论
• 本章小结
• 第三章 灵芝多糖的结构与抗氧化活性研究
• 3.1 不同分子量灵芝多糖的分离纯化
• 3.2 不同分子量灵芝多糖的理化性质的研究
• 3.3 不同分子量灵芝多糖的抗氧化作用
• 3.3.1 材料与仪器
• 3.3.2 方法与原理
• 3.3.2.1 对DPPH 自由基的清除作用
• 3.3.2.2 对羟基自由基的清除作用
• 3.3.2.3 对超氧自由基的清除作用
• 3.3.3 结果与讨论
• 3.4 抗氧化活性组分GLP-5的结构研究
• 3.4.1 紫外光谱分析
• 3.4.2 红外光谱分析
• 3.4.3 核磁共振波谱分析
• 本章小结
• 第二部分 海洋复方多糖药理作用的研究
• 第一章 样品的制备
• 1.1 灵芝多糖原料的制备
• 1.2 低分子量褐藻寡糖原料的筛选
• 1.2.1 材料与仪器
• 1.2.2 实验方法
• 1.2.3 结果与讨论
• 1.2.3.1 褐藻胶M 段、G 段的抗氧化作用
• 1.2.3.2 不同分子量低聚甘露糖醛酸的抗氧作用
• 1.3 M3000 的制备
• 本章小结
• 第二章 复方多糖体外抗氧化作用的研究
• 2.1 对DPPH 自由基的清除作用
• 2.2 对羟基自由基的清除作用
• 2.3 对超氧自由基的清除作用
• 本章小结
• 第三章 复方多糖增强小鼠免疫功能的研究
• 3.1 小鼠脏器/体重比值
• 3.2 体液免疫功能：血清溶血素的测定
• 3.3 细胞免疫功能：迟发型变态反应实验
• 3.4 单核—巨噬细胞功能：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞
• 本章小结
• 结论
• 参考文献