E-cadherin mRNA及其编码蛋白表达与肺癌的相关性研究

论文摘要

目的：从转录和翻译两个水平探讨E-cadherin（上皮钙粘蛋白，E-cad）与肺癌发生、发展及肺癌病理类型之间的相关性，明确是由于转录水平还是翻译水平受抑制而导致E-cad表达异常，从而为肺癌的发生、发展机制提供科学依据。研究方法：通过优化巢式RT-PCR反应条件，建立E-cad mRNA相对定量的检测方法。采用优化后的巢式RT-PCR方法和Western Blot方法检测30例肺癌患者的癌组织、癌旁组织、远癌组织和5例肺良性病变组织中的mRNA及其编码蛋白的表达情况，并对部分Western Blot结果用免疫组化方法进行验证。结果：1．确定优化后的反应体系为10×反应缓冲液2.5μl，dNTP200μmol／L，Mgcl21.5mmol╱L，引物600nmol╱L，Taq DNA聚合酶0.1U／μl，模板50ng，总体系25μl。反应条件为95℃预变性10分钟，95℃1分钟、66℃1分钟、72℃1分钟，第一次PCR为25个循环，第二次PCR和β—actin为35个循环，最后72℃延伸10分钟。2．癌中组、癌旁组、远癌组及肺良性对照组的E-cad与β—actin mRNA扫描面积相对比值的均数分别为1.33±0.48、1.61±0.55、1.93±0.45、2.09±0.09。经统计分析，癌中组与癌旁组以及癌中组与远癌组之间的差异具有统计学意义（P＜0.05）；癌旁组与远癌组之间的差异也有统计学意义（P＜0.05）。肺良性对照组与癌中组和肺良性对照组与癌旁组之间的差异有统计学意义（P＜0.05），但肺良性对照组与远癌组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。3．30例癌中组的鳞癌、腺癌、腺鳞癌E-cad mRNA表达的相对比值的均数分别为1.21±0.53、1.40±0.46、1.51±0.27；30例癌旁组中鳞癌、腺癌、腺鳞癌E-cad mRNA表达的相对比值的均数分别为1.59±0.45、1.58±0.67、1.80±0.26；30例远癌组中鳞癌、腺癌、腺鳞癌E—cad mRNA表达的相对比值的均数分别为1.85±0.41、1.90±0.44、2.37±0.53。将癌中组、癌旁组和远癌组中的鳞癌、腺癌及腺鳞癌的E-cad mRNA的相对比值分别进行统计学分析，均无统计学意义（P＞0.05）。4．Western Blot结果显示在30例癌组织中，E-cad的阳性率为36.7％（11／30）；30例癌旁组织E-cad的阳性率为70.0％（21／30）；而30例远癌组织中E-cad的阳性率为96.7％（29／30）。经卡方检验分析，E-cad蛋白在癌中组、癌旁组以及远癌组中的阳性率差异具有统计学意义（x2=24.83，P＜0.05），进一步用确切概率法进行两两比较发现癌中组E-cad阳性率明显低于癌旁组（x2=6.70，P＜0.017），也明显低于远癌组（x2=24.3，P＜0.017）；癌旁组E-cad阳性率明显低于远癌组（x2=7.68，P＜0.017）。5例肺部良性对照组织全部表达清晰的E-cad条带，所有标本的内参GAPDH都显示清晰的条带。5．在30例癌组织中，12例鳞癌的阳性率为33.3％（4／12），15例腺癌的阳性率为40％（6／15），3例腺鳞癌的阳性率为33.3％（1／3）。在30例癌旁组织中，12例鳞癌的阳性率为66.7％（8／12），15例癌旁组的阳性率为73.3％（11／15），3例腺鳞癌的阳性率为66.7％（2／3）。在30例远癌组织中，12例鳞癌的阳性率为91.7％（11／12），15例腺癌的阳性率为100％（15／15），3例腺鳞癌的阳性率100％（3／3）。经确切概率法检验，癌中组、癌旁组和远癌组的E-cad在鳞癌、腺癌与腺鳞癌中的表达差异均无统计学意义（x2=0.343，x2=0.464，x2=2.14，P＞0.05）。6．免疫组化结果显示5例肺癌患者的远癌组织和阳性对照片的E-cad均呈阳性表达，在细胞膜及细胞浆中呈现出深黄至棕黄色颗粒，清晰，提示了细胞之间有功能良好的细胞间隙连接和细胞粘附存在；5例患者的癌旁组织有1例（18号）标本E-cad表达阴性。而5例患者的癌组织及阴性对照片都表达阴性，少数癌中组织可见E-cad在细胞核表达和细胞膜表达，或细胞膜、细胞核同时表达，其表达异常率为100％，与Western Blot结果相符合。结论：1．癌中组E-cad mRNA及其编码蛋白表达明显低于癌旁组、远癌组和肺良性对照组，提示E-cad mRNA及其编码蛋白表达与肺癌的发生、浸润和转移有相关性，其缺失有促进肿瘤发生和向周围组织转移的趋势，并且可能为早期事件，这是因为E-cad在癌旁组和远癌组以及癌旁组和肺良性对照组中的表达差异也具有统计学意义。2．癌组织、癌旁组织和远癌组织中的E-cad mRNA及其编码蛋白表达在鳞癌、腺癌及腺鳞癌中的表达差异没有统计学意义，提示E-cad mRNA及其编码蛋白表达减少或缺失可能是肺鳞癌和肺腺癌发生、发展中的共同环节。3．本研究Western Blot结果与巢式RT-PCR结果完全符合，提示E-cad表达异常可能是由于其转录水平受抑制所引起。

论文目录

• 一、英文缩写语
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、论文主体
• 引言
• 第一部分:巢式RT-PCR检测肺组织中E-cadherin mRNA实验条件探讨
• 1.前言
• 2.材料和方法
• 3.结果（附表、附图）
• 4.讨论
• 5.参考文献
• 第二部分:E-cadherin mRNA及其编码蛋白表达与肺癌的相关性研究
• 1.前言
• 2.材料和方法
• 3.结果（附表、附图）
• 4.讨论
• 5.结论
• 6.参考文献
• 五、综述:E-cadherin与肺癌的关系及其在肺癌中的调控机制
• 六、待刊文章目录
• 七、致谢