论文摘要
目的:研究中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙离子通道的影响。通过甘松挥发油对钙离子通道电流(ICa-L)的量-效曲线、电流-电压（I-V）曲线、激活曲线和失活曲线的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常机制以及其电生理机制。方法:1.用急性酶解分离法分离大鼠心室肌细胞,以肝素抗凝,水合氯醛麻醉大鼠后,迅速游离并取出大鼠心脏,悬挂于Langendoff灌流系统离体灌流。先采用无钙台氏液灌流离体心脏约5分钟,再以50微摩尔/升（μmol/L）含蛋白酶E（ProNase E）和胶原酶Ⅰ（CollagenNaseⅠ）的低钙酶液灌流心脏,待心脏质地变软弹性降低,则停止酶液消化（大约25-35分钟）,再用200μmol/L低钙台氏液灌流心脏,冲洗灌流系统及心脏中残留酶液,然后剪下心室肌组织块并置于盛有KB液的烧杯中充分剪碎、轻轻吹打、200目尼龙网过滤后置于KB液中室温下静置约1-2小时,然后放入4℃冰箱保存。2.采用标准的全细胞膜片钳技术（电压钳）,选取杆状边缘完整、无收缩、横纹清晰和大小适中的细胞在室温下（20-25℃）进行膜片钳电流记录,以电阻为1.0-3.0兆欧姆（M?）的玻璃微电极封接大鼠心室肌细胞,形成吉欧高阻封接水平后以适当程度的负压破膜,补偿串联电阻和细胞膜电容（Cm）,形成全细胞记录模式,分别测定ICa-L的量-效曲线、电流-电压（I-V）曲线、激活曲线和失活曲线,观察不同浓度的甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜ICa-L的影响。结果:1.浓度为3μg/g,5μg/g,10μg/g,20μg/g,50μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制L型钙电流。3μg/g,5μg/g,10μg/g,20μg/g,50μg/g对大鼠心室肌细胞L型钙电流的抑制率分别为（11.18±1.48）%,（24.83±4.82）%,（45.72±3.54）%, （76.87±7.03）%, （100±0）%（每个浓度n=5,P<0.05）。2.甘松挥发油对ICa-L的电流密度-电压关系曲线（current density-voltage curve,I-V曲线）的影响:在浓度为10μg/g时,给药后电流密度从（10.17±1.49）pA/pF减小到（5.67±0.78）pA/pF （n=5,P<0.01）,可使心肌细胞ICa-L电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变。3.甘松挥发油对ICa-L激活动力学影响:使激活曲线向正电位方向变化,V1/2从（-5.47±0.50）mV右移至（-2.77±0.49）mV（n=5,P<0.05）,斜率因子从4.68±0.39减小至4.50±0.40（n=5,P>0.05）。4.甘松挥发油对Ica-L失活动力学影响:使失活曲线向负电位方向变化, V1/2从（-20.82±0.48）mV左移至（-29.44±1.03）mV（n=5,P<0.05）,斜率因子从6.16±0.43增大至11.05±0.86（n=5,P<0.05）。结论:1.甘松挥发油可呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞膜ICa-L电流,随着浓度增加阻断作用增强。2.甘松挥发油可使ICa-L的电流密度-电压关系曲线（I-V曲线）上移,但不改变曲线形状、激活电位、峰电位及反转电位。3.甘松挥发油使ICa-L激活曲线（activation curve）右移,减慢激活。4.甘松挥发油对ICa-L失活曲线（inactivation curve）左移,加快失活。
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