论文摘要
采用阳离子交换层析和凝胶过滤层析，从长白山白眉蝮蛇（Cloydius ussurensis）蛇毒中分离得到磷脂酶A2的同源物，SDS-PAGE检测为一条单带，质谱检测分子量为13880.789；该蛋白49位氨基酸残基为Gln，将其命名为Gln49-PLA2。Gln49-PLA2具有肌肉毒性，神经毒性，但缺乏磷脂酶A2活性。Gln49-PLA2对新鲜血浆和人纤维蛋白原的体外凝固作用结果表明：Gln49-PLA2能够剂量依赖性地诱导新鲜的人血浆及纤维蛋白原溶液凝固。在实验剂量下，凝固时间分别从139.5±4.56min降到12.87±0.12min，从180.67±1.86s降到19.00±0.58s；同时，随着Gln49-PLA2浓度的增大，血浆的复钙时间也明显缩短，从7.46±1.17min到0.75±0.33min。通过Gln49-PLA2对血浆凝血四项（凝血酶原时间PT，部分活化凝血酶时间APTT，凝血酶时间TT和纤维蛋白原浓度Fib）的影响，结果表明：Gln49-PLA2不影响Fib、TT；能够使PT时间从12.4±0.29s缩短到6.95±0.20s；能够使APTT从39.22±0.88s延长到44.47±0.47s。Gln49-PLA2不能激活凝血因子ⅩⅢ，并且其凝血活性不受肝素和antithrombinⅢ抑制。Gln49-PLA2具有精氨酸酯酶活力，以BAEE为底物所得的比活力为1747U／mg；且凝血酶比活为1100NIH thrombin U／mg。以上结果表明Gln49-PLA2是一种类凝血酶。Gln49-PLA2具有纤维蛋白原水解活性，优先迅速水解纤维蛋白原Aα链，释放纤维蛋白多肽A（FPA）。随着作用时间的延长（大于10小时），纤维蛋白原Bβ链也能被缓慢水解，释放纤维蛋白多肽B（FPB），且其水解活性及凝血活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF（苯甲磺酰氟）的抑制，但是不受金属蛋白酶抑制剂EDTA的抑制。由此判定Gln49-PLA2应该属于丝氨酸蛋白酶。Gln49-PLA2引起的血液凝固作用主要是水解纤维蛋白原，但与凝血级联反应中的凝血酶有本质不同，不能引起纤维蛋白交联。因此，Gln49-PLA2应该是一种新的类凝血丝氨酸蛋白酶。
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摘要Abstract引言1 文献综述1.1 概述1.2 血液凝固1.2.1 FV激活因子1.2.2 FX激活因子1.2.3 凝血酶原激活因子1.2.4 FⅨ/Ⅹ抑制剂1.2.5 蛋白C激活剂1.2.6 纤维蛋白（原）水解1.3 蛇毒类凝血酶1.3.1 蛇毒类凝血酶的分布1.3.2 蛇毒类凝血酶的特征1.3.3 蛇毒类凝血酶的生物学特征1.3.4 蛇毒类凝血酶的应用1.3.5 蛇毒类凝血酶研究发展方向2（PLA2）的研究'>1.4 磷脂酶A2（PLA2）的研究2的分类'>1.4.1 磷脂酶A2的分类2的结构特征'>1.4.2 磷脂酶A2的结构特征2的功能及其作用机制'>1.4.3 磷脂酶A2的功能及其作用机制2 课题的研究背景及研究内容2（Gln49-PLA2）的制备及凝血活性分析'>3 蛇毒磷脂酶A2（Gln49-PLA2）的制备及凝血活性分析3.1 实验材料及仪器3.1.1 实验材料3.1.2 实验仪器3.2 实验方法2的制备'>3.2.1 白眉蝮蛇蛇毒Gln49-PLA2的制备3.2.2 蛋白浓度的确定3.2.3 纯化蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳2体外凝血活性的测定'>3.2.4 Gln49-PLA2体外凝血活性的测定3.3 实验结果2的纯化制各'>3.3.1 Gln49-PLA2的纯化制各3.3.2 Gln49-PLA2体外凝血活性3.4 讨论2凝血作用机制研究'>4 Gln49-PLA2凝血作用机制研究4.1 材料与仪器4.1.1 实验材料4.1.2 实验仪器4.2 实验方法4.2.1 复钙时间4.2.2 精氨酸酯酶活性4.2.3 类凝血酶活性2对凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）的作用'>4.2.4 Gln49-PLA2对凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）的作用2水解纤维蛋白原的作用'>4.2.5 Gln49-PLA2水解纤维蛋白原的作用2凝血活性的影响'>4.2.6 纤维蛋白原含量对Gln49-PLA2凝血活性的影响2凝血活性的影响'>4.2.7 肝素对Gln49-PLA2凝血活性的影响2凝血活性的影响'>4.2.8 FXa对Gln49-PLA2凝血活性的影响4.3 实验结果4.3.1 复钙时间2的精氨酸酯酶活性'>4.3.2 Gln49-PLA2的精氨酸酯酶活性2类凝血酶活性'>4.3.3 Gln49-PLA2类凝血酶活性2纤维蛋白原水解活性'>4.3.4 Gln49-PLA2纤维蛋白原水解活性2凝血活性的影响'>4.3.5 纤维蛋白原浓度对Gln49-PLA2凝血活性的影响2对凝血因子ⅩⅢ的作用'>4.3.6 Gln49-PLA2对凝血因子ⅩⅢ的作用2凝血活性的影响'>4.3.7 肝素对Gln49-PLA2凝血活性的影响2凝血活性的影响'>4.3.8 FXa对Gln49-PLA2凝血活性的影响4.4 讨论5 结论与展望5.1 结论5.2 展望创新点参考文献附录攻读硕士学位期间发表学术论文情况致谢
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标签：凝血活性论文; 纤维蛋白原论文; 类凝血酶论文; 丝氨酸蛋白酶论文;
