GM-CSF对肥大细胞蛋白酶激活受体表达和介质分泌的影响及其信号转导通路探讨

论文摘要

背景与目的:蛋白酶激活受体（protease activated receptors,PARs）,白细胞介素（interleukin,IL） IL-4,IL-6参与过敏反应的发生,粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）具有调节免疫应答的功能,然而GM-CSF对肥大细胞分泌细胞因子的影响还不甚清楚。因此本研究探讨GM-CSF对肥大细胞P815 PARs表达和IL-4,IL-6分泌的影响,并探讨可能的信号转导通路。方法:肥大细胞P815激发后,收集各时间点的细胞和上清。细胞处理后采用实时定量PCR和流式细胞术的方法在mRNA和蛋白水平检测PAR-1,PAR-2,PAR-3和PAR-4表达情况,用细胞激发信号ELISA（cellular activation of signaling ELISA,CASE）方法检测信号转导通路蛋白Akt,ERK,p38和STAT3磷酸化情况;上清用ELISA方法检测IL-4,IL-6水平。结果:GM-CSF上调PAR-2蛋白和mRNA在肥大细胞P815上的表达;GM-CSF上调PAR-1,PAR-3和PAR-4 mRNA在肥大细胞P815的表达;GM-CSF抗体的应用可以阻断GM-CSF对PARs蛋白表达的调节作用。GM-CSF以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4和IL-6;应用PD98059, U0126和LY294002可以阻断GM-CSF引起的肥大细胞IL-4和IL-6分泌并抑制其引起的ERK和Akt磷酸化。结论:GM-CSF能够调节肥大细胞PARs表达并刺激肥大细胞分泌IL-4和IL-6。GM-CSF引起肥大细胞P815分泌细胞因子很可能是通过激活Akt和ERK信号转导通路实现的,这些发现提示GM-CSF可以条件依赖性的调节Th1细胞因子和/或Th2细胞因子分泌,从而在过敏性炎症中发挥重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语
• 第1章：前言
• 第2章：材料与方法
• 2.1 主要试剂和仪器
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计学方法
• 第3章：结果
• 3.1 GM-CSF 对 P815 细胞 PARs 基因表达的调节作用
• 3.2 GM-CSF 对 P815 细胞 PARs 蛋白表达的调节作用
• 3.3 GM-CSF 对肥大细胞 P815 细胞因子分泌的影响
• 3.4 PD98059, U0126, U0124,SB203580, LY294002 和 AG490 对GM-CSF引起的P815细胞IL-4和IL-6分泌的影响
• 3.5 PD98059, U0126, SB203580, LY294002 和 AG490 对GM-CSF引起的ERK,p38,Akt和STAT3磷酸化的影响
• 第4章：讨论
• 第5章：结论
• 第6章：参考文献
• 综述
• 致谢
• 发表论文
• 本人简历