DEV基因文库构建、核衣壳蛋白基因的发现及克隆与表达

论文题目: DEV基因文库构建、核衣壳蛋白基因的发现及克隆与表达

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 文明

导师: 程安春,汪铭书

关键词: 鸭病毒性肠炎病毒,基因组,限制性核酸内切酶分析,基因文库,核衣壳蛋白基因,构建,表达,抗原性

文献来源: 四川农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 鸭病毒性肠炎(Duck virus enteritis,DVE),俗称鸭瘟(Duck plague,DP)是鸭、鹅和大雁等雁形目水禽的一种急性接触性传染病。感染后,患鸭主要表现为急性败血性过程,其特征是血管损伤、体腔出血、消化道出血(或炎症、坏死)、淋巴器官受损及实质器官退行性变化等,具有较高的发病率和死亡率,是目前水禽养殖业的重要传染病之一。本病病原为鸭病毒性肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),俗称鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV),亦称鸭疱疹病毒1型(Anatid herpesvirus 1,AHV-1),系疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科成员之一,是一种泛嗜性全身性感染的病毒。本研究以DEV CHv株为基本材料,对该毒株进行了提纯研究和基因组酶切分析;构建了DEV基因文库,经比对发现并克隆、鉴定了其核衣壳蛋白基因;利用该基因片段设计引物,建立了基于DEV核衣壳蛋白基因的一种PCR检测方法;同时将该基因克隆到原核表达载体pET32a中,对其进行了表达及其表达产物抗原性的研究。主要内容包括: 1.比较了四种方法对DEV Chv株的提纯效果,并对病毒结构蛋白进行了初步分析:将DEV CHv株经鸭胚和鸭胚成纤维细胞(DEF)进行培养增殖后,收集病毒液,采用沉淀法、层析法、差速离心法和蔗糖密度梯度离心法等4种方法对DEV进行了提纯比较,结果表明:通过DEF增殖、经不连续蔗糖密度梯度法提纯DEV,效果较好,电镜下能观察到纯净、多量的完整病毒粒子;病毒粒子由囊膜、衣壳和核芯等三个部分组成,直径为170nm～190nm;在囊膜与衣壳之间还存在一层较厚的皮层结构。用Bradford法测得纯化病毒液中的病毒含量为0.71mg/mL;经SDS—PAGE电泳发现,DEV结构蛋白主要由11种多肽组成,即VP1(190kD)、VP2(136kD)、VP3(106kD)、VP4(88kD)、VP5(75kD)、VP6(68kD)、VP7(56kD)、VP8(48kD)、VP9(42kD)、VP10(38kD)

论文目录:

中文摘要

ABSTRACT

英文缩写

文献综述

第一章 几种家禽疱疹病毒研究概况

第二章 病毒结构蛋白的功能及其体外表达优化策略

实验研究

第三章 DEV CHv株的增殖、提纯及其结构蛋白初步分析

1． 材料

2． 方法

3． 结果与分析

4． 讨论

5． 小结

第四章 DEV CHv株基因组 DNA的限制性内切酶分析

1． 材料

2． 方法

3． 结果与分析

4． 讨论

5． 小结

第五章 DEV基因文库构建及核衣壳蛋白基因的发现、克隆与鉴定

1． 材料

2． 方法

3． 结果与分析

4． 讨论

5． 小结

第六章 基于DEV核衣壳蛋白基因PCR方法的建立与应用

1． 材料

2． 方法

3． 结果与分析

4． 讨论

5． 小结

第七章 DEV核衣壳蛋白基因原核表达载体的构建

1． 材料

2． 方法

3． 结果与分析

4． 讨论

5． 小结

第八章 DEV重组核衣壳蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及其抗原性初探

1． 材料

2． 方法

3． 结果与分析

4． 讨论

5． 小结

结论

参考文献

致谢

作者简介

读书期间发表或参与发表论文情况

发布时间: 2005-10-27

参考文献

• [1].水泡性口炎病毒核衣壳蛋白和磷酸蛋白上关键氨基酸的功能研究[D]. 陈龙云.武汉大学2014
• [2].猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的高效可溶性表达和检测血清抗体的间接ELISA方法的建立[D]. 陈义平.扬州大学2003
• [3].SARS-CoV核衣壳蛋白调控TGF-β信号转导的研究[D]. 赵心刚.清华大学2007
• [4].PRRSV核衣壳蛋白在病毒转录过程中的作用研究[D]. 刘欢.中国农业科学院2017
• [5].基于反向遗传平台的套式病毒蛋白结构与功能研究[D]. 张荣.中国农业科学院2013
• [6].北京地区人偏肺病毒全基因组序列、血清流行率分析及B细胞表位研究[D]. 卢桂兰.北京协和医学院2009
• [7].聚合酶相关蛋白在基因Ⅶ型新城疫病毒致病性中的作用[D]. 于晓慧.中国农业大学2017
• [8].猪圆环病毒2型感染诱导PK-15细胞自噬机制研究[D]. 朱炳林.浙江大学2012
• [9].鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的测定及含该毒株全基因组cDNA的转录载体的构建[D]. 黄勇.扬州大学2003

相关论文

• [1].鸭瘟病毒蛋白质组二维电泳特性和UL24基因的发现、原核表达及应用研究[D]. 贾仁勇.四川农业大学2008
• [2].GPV VP及NS基因克隆及其原核表达产物的研究和应用[D]. 布日额.东北农业大学2005
• [3].PRRSV-SCQ株结构基因生物信息学及人工感染仔猪病理变化与超微结构研究[D]. 颜其贵.四川农业大学2005
• [4].鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株部分生物学特性的研究及荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用[D]. 郭宇飞.四川农业大学2005
• [5].卡特利链霉菌A520基因文库的构建以及硫霉素生物合成基因的初步研究[D]. 向隆宽.中国协和医科大学1998
• [6].家鸭人工感染鸭瘟强毒株的动态分布、黏膜免疫及对肠道菌群结构的影响[D]. 杨晓燕.四川农业大学2006
• [7].鸭疫里默氏杆菌荚膜多糖输出蛋白基因的发现及其免疫原性研究[D]. 朱德康.四川农业大学2006
• [8].鸭肠炎病毒部分基因组序列的克隆与分析[D]. 陈淑红.东北农业大学2006
• [9].猪胸膜肺炎放线杆菌差减基因文库构建及免疫应答相关基因筛选[D]. 雷连成.吉林大学2007
• [10].鸭肠炎病毒部分基因结构及相关功能的初步研究[D]. 李慧昕.中国农业科学院2007

标签：鸭病毒性肠炎病毒论文;  基因组论文;  限制性核酸内切酶分析论文;  基因文库论文;  核衣壳蛋白基因论文;  构建论文;  表达论文;  抗原性论文;