自然铜微生物浸出液的药理药效学初步研究

论文摘要

自然铜(Pyritum)是常用的接骨中药,在传统接骨方药中占有很大的比重,内服外用皆宜,在中药中具有举足轻重的地位。但是自然铜常以未溶解状态的粗糙矿物原粉入药,造成用量大、有效成分难溶解等问题。因而自然铜和含自然铜中成药在医药市场上受到了限制。本文利用本实验室分离鉴定的一株高活性的嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillusferrooxidans,At.f)对矿物药自然铜进行处理,初步检验了自然铜浸出液对成骨细胞增殖、分化的影响,并且对自然铜浸出液的促进骨折愈合和预防骨质疏松药效实验进行了初步的探讨。通过对自然铜浸出液的铁、铜、锰、锌、硒金属离子浓度的测定,结果表明嗜酸氧化亚铁硫杆菌对自然铜有浸出作用。15天后溶液中可溶性铁浓度达到1592μg/mL,浸出率为68.33%。其他金属元素的浓度也较浸出前增大。应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法观察自然铜不同浓度浸出液对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性的影响。结果表明:自然铜浸出液在1/40、1/80两个浓度时,明显抑制成骨细胞的增殖,其他浓度对细胞增殖无影响。而在1/2560浓度时,浸出液对细胞ALP活性具有明显的增强作用。探讨自然铜浸出液对地塞米松致大鼠骨质疏松的预防作用。SD大鼠随机分组给药,6周后测定大鼠血清钙浓度、碱性磷酸酶活性、股骨骨密度、骨矿盐含量,并且进行股骨组织学切片观察。结果表明:大鼠血清钙浓度无变化,而血清碱性磷酸酶活性实验组明显高于阴性组。大鼠股骨骨密度及骨矿盐含量均无变化。但是股骨组织学观察发现,实验组股骨骨小梁结构较阴性组的排列紧密,所以初步证明自然铜浸出液对预防骨质疏松有一定的作用,仍需进一步研究。探讨自然铜浸出液对大鼠骨折愈合的作用。SD大鼠,随机分为3组,阳性组、实验组、阴性组,分别于7、14、21天测定血清钙浓度、碱性磷酸酶活性,并观察X光片、组织学切片。结果表明:在14、21天实验组血钙浓度均低于阴性组,且差异显著。在14天时,实验组血清ALP活性均高于阴性组,且差异显著。X光片显示,在14、21天时,实验组骨折处骨痂面积大于阴性组。组织学切片显示,在21天时,实验组的软骨性骨痂和骨小梁形成及骨损伤愈合方面明显早于阴性组。

论文目录

• 缩略词
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 研究背景
• 1 自然铜
• 1.1 自然铜的起源
• 1.2 自然铜的药用价值及其炮制
• 2 生物冶金
• 2.1 浸矿细菌的种类及代谢
• 2.1.1 氧化亚铁硫杆菌（Thiobacillus ferrooxidans,T.f）
• 2.1.2 氧化硫硫杆菌（Thiobacillus thiooxidans,T.t）
• 2.1.3 Leptospirillumferrooxidans（L.f）及混合嗜酸菌
• 2.1.4 Thermopjillic thiobacilli
• 2.1.5 Sulfolobus
• 2.1.6 其他菌株及菌株间的混合
• 2.2 浸矿机理
• 2.2.1 细菌的直接作用
• 2.2.2 细菌的间接作用
• 2.2.3 初级次级反应
• 2.2.4 原电池效应
• 3 课题的提出
• 第二部分 自然铜浸出液的制备
• 1 材料
• 1.1 药物
• 1.2 培养基
• 1.3 菌种
• 2 方法
• 2.1 嗜酸氧化亚铁硫杆菌的培养
• 2.2 自然铜浸出液的制备
• 2.3 金属元素的测定
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三部分 自然铜浸出液对成骨细胞增殖、分化的影响
• 1 材料
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 细胞
• 1.4 药物
• 2 方法
• 2.1 成骨细胞的培养
• 2.2 细胞悬液的制备
• 2.3 药液的制备
• 2.4 成骨细胞增殖的测定
• 2.5 成骨细胞ALP活性的测定
• 3 结果
• 3.1 不同浓度浸出液对成骨细胞增殖的影响
• 3.2 不同浓度浸出液对成骨细胞ALP活性的影响
• 4 讨论
• 第四部分 自然铜浸出液对地塞米松致大鼠骨质疏松预防作用研究
• 1 材料
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 药物
• 2 方法
• 2.1 大鼠骨质疏松模型的建立、分组及给药
• 2.2 大鼠血清生化指标的测定
• 2.3 大鼠股骨骨密度的测定
• 2.4 大鼠股骨组织学观察
• 3 结果
• 3.1 浸出液对骨质疏松大鼠血清钙、ALP的影响
• 3.2 浸出液对骨质疏松大鼠股骨骨密度的影响
• 3.3 对骨质疏松大鼠股骨组织学的观察
• 4 讨论
• 第五部分 自然铜浸出液对促进大鼠骨折愈合作用的研究
• 1 材料
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 药物
• 2 方法
• 2.1 大鼠骨折模型的建立、分组及给药
• 2.2 大鼠血清生化指标的测定
• 2.3 大鼠X线观察
• 2.4 大鼠组织学观察
• 3 结果
• 3.1 浸出液对骨折大鼠血清钙、ALP的影响
• 3.2 浸出液对大鼠骨折愈合促进作用的X线观察
• 3.3 浸出液对大鼠骨折愈合促进作用的组织学观察
• 4 讨论
• 第六部分 实验结论
• 参考文献
• 研究成果
• 附 实验动物质量合格证
• 致谢