细胞色素P450 2E1在脂肪性肝病中的致病作用

论文摘要

背景：近年来脂肪性肝病（fatty liver disease，FLD）患病率呈逐年增高趋势，其防治也逐渐受到重视，但FLD发病机制复杂，迄今仍不明确。细胞色素P450 2E1是微粒体氧化酶系统中主要代谢酶之一，在肝脏对内、外源性物质的代谢中起重要作用。研究发现脂肪肝时，细胞色素P450 2E1表达增强，在肝脏内和脂肪变的程度、分布相一致，提示CYP2E1参与了脂肪肝的形成。但FLD进一步发展至脂肪性肝炎、纤维化时CYP2E1的表达状况，及相关机制性的研究，目前国内外尚未见报道。目的：本实验旨在研究（1）酒精和高脂饮食两大脂肪性肝病病因单独和联合对CYP2E1表达影响（2）CYP 2E1与肝细胞脂肪变、炎症坏死的关系，探讨可能的机制。为脂肪性肝病发病机制进一步的完善奠定实验基础。方法：46只雄性Wistar大鼠按体重层次随机分为4组建立模型：酒精组（A），高脂饮食组（F），酒精加高脂饮组（FA），对照组（N）。A组用30％-50％的酒精（v／v）灌胃，逐渐加大酒精浓度，10ml／kg，bid；F组高脂饮食为：2％胆固醇加10％猪油加88％的普通饲料：FA组为两者的叠加。12、16周随机抽取实验组大鼠各一只，行组织切片镜下分别显示脂肪肝和轻度炎症纤维化。16周末股动脉放血处死全部大鼠，检测所需指标：生化法测定血清ALT，AST，FFA，TG，CHO，HE染色肝组织。免疫组化法及RT-PCR测CYP 2E1和mRNA的表达；肝匀浆生物化学测定MDA、SOD、GSH。组内CYP2E1表达，与肝脏脂肪变、炎症程度、抗氧化和脂质过氧化指标之间进行相关性检验，各指标组间进行方差分析，两两比较和析因分析检验。结果：1．大鼠体重及肝脏指数变化：F组大鼠体重明显高于其他各组（P＜0.05），A、N、FA三组比较差异无显著性P＞0.05。肝指数比较，各实验组均比N组不同程度的升高（P＜0.05），以FA组最高，其次是F组、A组，而F组和A组间差异无显著性（P＞0.05）。2．肝脏组织学改变：H-E染色显示，N组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞呈多边形围绕中央静脉呈放射状，肝窦清晰可见，肝小叶汇管区基本结构清晰可见。实验组大鼠肝脏轻至中重度脂肪变，伴肝细胞气球样变，点灶状坏死，汇管区轻至中度炎细胞浸润，其中以FA和F脂肪变最严重，FA组炎症坏死最重和其他各组相比P＜0.05，可以看到汇管区轻度纤维化。3．各组血清生化指标的变化：实验组ALT、AST均比N组高，且差别有显著性意义（P＜0.05），以FA组最高，其次是F组和A组，但F组和A组比较差异无统计学意义（P＞0.05），其余各组比较差异均有显著性。4．各组血脂及血清游离脂肪酸的结果：实验组大鼠体内血脂均有不同程度的升高，FA组升高最显著，其次是F组、A组。5．各组肝组织匀浆抗氧化指标测定结果：GSH、SOD在实验组均有不同程度的降低，以FA组最为明显，其次是F组和A组，但是F组和A组间差别无统计学意义；MDA中实验组均有不同程度的升高，以FA组最为明显，其次是A组、F组，但是F组与A组间无统计学意义（P＞0.05）。6．肝组织内CYP 2E1的表达：实验组肝组织内CYP 2E1表达明显增加，且分布呈一定规律性，多集中在肝腺胞3区，门静脉周围并向2、1区扩展。在脂肪变、炎症重的肝组织内表达增强，FA组CYP 2E1表达最强（P＜0.01），其次是F组和A组。在正常组织内CYP2E1轻度表达，集中在肝腺胞3区的2-3个细胞界板内。7．肝组织内CYP 2E1 mRNA的表达：CYP2 E1基因的表达，各组两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05），由大到小依次为FA、F、A、N组。CYP 2E1 mRNA表达的析因分析显示，加用与不加用酒精（A）对肝脏CYP 2E1基因的表达差异有显著性意义（P=0.00）；加用与不加用高脂饮食（F）对CYP 2E1基因表达有显著性差异（P=0.00）；F与A交互效应显著（P=0.04）。8．各组CYP 2E1，MDA、脂肪变程度、炎症程度相关性分析实验组CYP 2E1和MDA呈明显正相关（r=0.983，P＜0.01）而和GSH、SOD成明显负相关（r值分别为-0.833，-0.948，P＜0.01），与脂肪变性程度和炎症积分成显著正相关（r值分别是0.618，0.966，P＜0.01）。结论：1．酒精和FFA是肝脏CYP 2E1的诱导剂，诱导机制可能分别在蛋白质和DNA水平，两因素同时作用，对CYP 2E1有协同诱导作用。2．CYP 2E1可能主要通过增强氧应激参与FLD中肝细胞脂肪变、炎症因子诱导等过程，3．CYP 2E1是AFLD和NAFLD的共同发病机制。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 实验材料与实验方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢