EGCG活化caspase依赖的线粒体途径诱导人胃癌细胞凋亡

论文摘要

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate, EGCG）通过活化caspase依赖的线粒体途径诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用机制。方法:MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;罗丹明123（Rhodamine 123,Rh123）和碘化丙啶（PI）双染,流式细胞术（flow cytometry, FCM）分析测定细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,?ψm）和凋亡率;caspase-9分光光度法检测试剂盒检测经EGCG处理后BGC823细胞中caspase-9活性;免疫细胞化学法和Western blot检测EGCG处理后BGC823细胞中线粒体凋亡信号传导通路相关蛋白,如Bax、Bcl-2、caspase-9、Cyt c、caspase-3等的表达。结果:EGCG.对BGC823细胞生长有显著抑制作用,呈时间和剂量依赖性。Rh123/PI双染FCM检测结果显示, EGCG（20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml）作用24h后,BGC823细胞中?ψm降低,细胞凋亡率增加,EGCG合用caspase-9特异性抑制剂（Ac-LEHD-CHO）组BGC823细胞中?ψm及细胞凋亡率与对照组比较差异无显著性,EGCG 40μg/ml作用12h、24h、48h后,BGC823细胞中?ψm降低,细胞凋亡率增加,说明EGCG以剂量和时间依赖方式诱导BGC823细胞凋亡,Ac-LEHD-CHO能阻断EGCG诱导的凋亡。caspase-9分光光度法检测试剂盒检测到,EGCG能以剂量和时间依赖方式增加caspase-9活性,Ac-LEHD-CHO能抑制EGCG增加caspase-9活性。免疫细胞化学法和Western blot检测结果显示,EGCG能促进细胞色素c（cytochrome c, Cyt c ）释放,Bax、caspase-9和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下调,呈剂量依赖性,Ac-LEHD-CHO可以阻断上述作用;EGCG 40μg/ml作用12h、24h、48h后,BGC823细胞中Cyt c释放增加,Bax、caspase-9和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下调,呈时间依赖性。结论:EGCG能抑制BGC823细胞增殖,并通过活化caspase依赖的线粒体信号传导途径诱导其凋亡。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 前言
• 材料与方法
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 硕士期间撰写的论文
• 主要英文缩略语索引
• 致谢