大豆蛋白致仔猪肠道过敏反应作用及检测技术研究

论文摘要

本文研究了大豆蛋白过敏对仔猪生长性能和肠道功能的影响,分析了大豆蛋白各组分致敏性,在此基础上鉴定获得含IgE过敏抗原表位的短肽氨基酸序列,并以其为免疫抗原成功制备了单克隆抗体,为今后开展仔猪肠道健康调控、大豆蛋白致敏机理及致敏原检测技术研究提供依据和保障。论文共分三部分：试验一：大豆蛋白过敏反应对仔猪生长性能及肠道功能影响。试验选用品种相同、胎次及体况相近母猪所产仔猪8窝,随机分为2组,每组4个重复,每重复1窝。对照组饲喂无大豆蛋白日粮,试验组饲喂含32%去皮豆粕日粮。试验仔猪7日龄补饲,28日龄断奶,至49日龄结束。试验结果表明：（1）与对照组相比,试验组仔猪日增重降低37.5%（P<0.01）,料重比增加59.9%（P<0.05）；（2）试验组仔猪28、35日龄血清中,二胺氧化酶（DAO）活性分别比对照组提高了22.9%（P<0.05）、13.6%（P<0.05）,内毒素（ET）浓度分别比对照组提高了37.0%（P<0.05）、20.0%（P>0.05）,D-乳酸（D-LAC）浓度分别比对照组提高了30.0%（P<0.05）、28.0%（P<0.05）,D-木糖（D-Xylose）浓度则分别降低了29.0%（P<0.05）、11.1%（P>0.05）。上述结果提示由大豆蛋白引起的仔猪过敏反应,使仔猪肠道功能受损,营养物质吸收减少,有害物质进入体内,最终导致仔猪生长性能下降。试验二：大豆蛋白IgE抗原表位研究。采用间接ELISA方法遴选大豆蛋白过敏阳性仔猪血清,以其作为一抗采用免疫印迹技术分析大豆蛋白各组分的致敏性。根据β-伴大豆球蛋白α亚基氨基酸序列,合成7条短肽,通过致敏性分析,鉴定含IgE抗原表位的短肽。结果明：（1）免疫印迹图谱显示,β-伴大豆球蛋白α、α’、β三个亚基均可与阳性血清反应,是大豆蛋白的主要致敏原组分,可引起IgE介导的过敏反应。（2）间接ELISA结果显示,7条短肽均能与阳性血清中的IgG产生特异性反应,其中肽7的OD值最高（即血清中相应的特异性抗体含量最高）；4条短肽能与阳性血清中IgE产生特异性反应,同样肽7的OD值最高（即血清中相应的特异性抗体含量最高）。由此可见,本试验所合成的7条短肽中,肽7的致敏性最强,可作为制备单克隆抗体的抗原。试验三：β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备及鉴定。采用试验二鉴定得到的含IgE抗原表位短肽作为抗原免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，经克隆和间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗β-伴大豆球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blot分析表明,该单克隆抗体能特异地与β-伴大豆球蛋白反应。间接ELISA测定表明,腹水效价为1：32000。亚类鉴定结果表明,该单克隆抗体为IgGl型,轻链为κ链。p-伴大豆球蛋白单克隆抗体的成功制备,为建立基于抗原表位的大豆蛋白致敏原检测技术奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文对照缩写词
• 引言
• 第一部分 文献综述
• 1 大豆抗原蛋白的组成
• 2 大豆抗原蛋白的致敏机理
• 3 大豆抗原蛋白对断奶仔猪的影响
• 4 消除大豆蛋白致敏性的加工技术
• 5 大豆球蛋白和B-伴大豆球蛋白抗原表位的研究
• 6 大豆抗原蛋白的单克隆抗体的研究
• 7 小结
• 参考文献
• 第二部分 试验部分
• 试验一 大豆蛋白过敏对仔猪生长性能和肠道功能的影响
• 1 材料与方法
• 2 试验结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 试验二 B-伴大豆球蛋白IGE抗原表位研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 试验三 B-伴大豆球蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
• 1 材料与方法
• 2 试验结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 在读学位期间发表的论文