论文摘要
金莲花（TrolliuschinensisBunge）属于毛茛科金莲花属的干燥花及花蕾,是多年生草本植物,在我国北方和西南地区多有分布。金莲花作为药用在我国历史悠久,民间用于治疗扁桃体炎、口腔喉肿、急性肠炎等疾病。现代药理学研究表明,金莲花具有抑菌、抗病毒、抗氧化等药理活性,黄酮类化合物是其中主要活性成分,其中含量较高的有效成分单体是荭草苷和牡荆苷,属于黄酮碳苷。目前,国内外学者对金莲花中有效成分的药理研究主要集中在总黄酮的抑菌、抗炎、抗病毒方面。本课题组进行了有关金莲花黄酮和单体荭草苷、牡荆苷的体外抗氧化研究,结果表明金莲花黄酮及有效成分单体荭草苷和牡荆苷具有清除超氧阴离子、羟基自由基、DPPH能力以及对红细胞溶血的保护作用,证明了金莲花有效成分单体荭草苷和牡荆苷具有体外抗氧化作用,为进一步研究荭草苷和牡荆苷的体内抗氧化提供了实验依据。本课题通过研究金莲花中有效成分单体荭草苷和牡荆苷在D-半乳糖致衰小鼠体内抗氧化作用,比较金莲花中荭草苷和牡荆苷抗氧化作用,筛选出抗衰老作用最佳药物的构效关系,为新类型抗衰老药物的发现,合成新型抗衰老药物提供研究方向。1衰老模型的复制采用D-半乳糖致亚急性衰老法,按体重调整给药剂量,每天腹腔注射D-半乳糖,连续给药八周。在造模6周时,正常组小鼠（按体重注射生理盐水）和模型组小鼠取血,检测血清总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）;在造模8周时,模型组再取血一次,检测上述指标,以验证小鼠衰老情况。2实验分组与给药造模成功后,实验分9组:模型组、正常对照组、荭草苷和牡荆苷高、中、低各三个剂量组、维生素E对照组,各治疗组从第9周开始每日上午分别口服灌胃给药,正常对照组和模型对照组给等体积的生理盐水,每日一次。确定荭草苷和牡荆苷低剂量组10mg/kg,荭草苷和牡荆苷中剂量组20mg/kg,荭草苷和牡荆苷高剂量组每日剂量是40mg/kg,维生素E组每日20mg/kg。每天称重一次,依据小鼠每次的体重调整给药剂量,给药时间8周。3小鼠一般状态观察观察各组小鼠一般状态,摄食及饮水情况、体重、活动度、毛色、光泽度变化等方面的改变情况,断头处死后,快速取全脑精确称重,检测各个剂量组脑组织的质量变化。4血清抗氧化酶系的检测方法断头取血,离心得血清,检测T-AOC、CAT、SOD、GSH-PX酶系。5组织中抗氧化酶系的检测方法断头取血后,在冰冻的条件下快速取肝、脑、肾,做组织匀浆,离心取上清液,测各组织中CAT、SOD、GSH-PX、MDA酶系。6小鼠肝、脑、肾组织中细胞膜转运离子能力的测定按试剂盒说明操作,按公式计算酶的活力。7脑中脂褐素的检测以及脑组织形态学的观察7.1脂褐素的检测迅速剥取小鼠大脑部分,按一定比例加入氯仿:甲醇（V/V=2:1）,制成组织匀浆,离心,取上清液测其荧光强度（激发光波长360nm,发射光波420nm）,以新配制的硫酸奎宁标准液（lμg/mL）荧光强度为50来计算脑组织中脂褐素的含量。7.2脑组织形态学的观察光镜观察细胞形状、大小、数量,细胞是否完好、排列是否整齐、细胞有无变性;电镜观察小鼠海马超微结构包括细胞膜,细胞核是否完整清晰以及脂褐素有无沉积。实验结果表明:1第六周空白组血清中T-AOC、SOD、CAT的含量与模型组分别进行数学统计,都具有显著性差异（P<0.01）。第八周空白组血清中T-AOC、SOD、CAT的含量与模型组分别进行数学统计,都具有显著性差异（P<0.01）表明成功复制了D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型。2小鼠一般形态观察,空白组毛色光滑、细顺、精神良好、行动灵活,模型组毛色暗淡、粗糙、脱毛现象较严重、身体瘦弱、精神萎靡。与模型组相比,荭草苷和牡荆苷各剂量组的毛色光滑程度、体重都有所恢复。荭草苷与牡荆苷各剂量组能够延缓D-半乳糖致衰小鼠脑组织的萎缩,与模型组相比有显著性差异（P<0.05）,荭草苷与牡荆苷同一剂量组相比无显著性差异。3金莲花单体荭草苷和牡荆苷具有提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的活性,与模型组相比,各剂量组具有显著的统计学意义（P<0.05,P<0.01）。金莲花单体荭草苷中、低剂量组在提高血清中抗氧化酶系的活性高于牡荆苷同等的剂量组,具有统计学意义（P<0.05）。荭草苷和牡荆苷高剂量组相比,无显著性差异。金莲花单体荭草苷和牡荆苷中、低剂量组在提高血清中抗氧化酶系的活性低于维生素E,具有显著性差异（P<0.05）,荭草苷和牡荆苷高剂量组与维生素E相比无显著性差异。4金莲花单体荭草苷和牡荆苷具有提高小鼠肝、脑、肾组织中SOD、CAT、GSH-PX的活性和降低MDA的含量的活性,与模型组相比,荭草苷和牡荆苷各剂量组都具有显著的统计学意义（P<0.05,P<0.01）。金莲花单体荭草苷中、低剂量组在提高小鼠肝、脑、肾组织中抗氧化酶系的活性高于牡荆苷同等的剂量组,具有统计学意义（P<0.05）,荭草苷和牡荆苷高剂量组相比无显著性差异。金莲花单体荭草苷和牡荆苷中、低剂量组在提高组织中抗氧化酶系的活性低于维生素E,具有显著性差异（P<0.05）,荭草苷和牡荆苷高剂量组无显著性差异。5金莲花单体荭草苷和牡荆苷具有提高小鼠肝、脑、肾组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,与模型组相比,金莲花单体荭草苷和牡荆苷各剂量组都具有显著的统计学意义（P<0.05,P<0.01）。金莲花单体荭草苷在中、低剂量组提高小鼠肝、脑、肾组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性高于牡荆苷同等的剂量组,具有统计学意义（P<0.05）。荭草苷和牡荆苷高剂量组分别相比,无显著性差异。金莲花单体荭草苷和牡荆苷中、低剂量组在提高组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性的活性低于维生素E,具有显著性差异（P<0.05）,荭草苷和牡荆苷高剂量组无显著性差异。6金莲花单体荭草苷和牡荆苷具有降低小鼠脑组织中脂褐素的含量,与模型组相比,金莲花单体荭草苷和牡荆苷各剂量组都具有显著的统计学意义（P<0.05,P<0.01）。在降低小鼠脑组织中脂褐素的含量金莲花单体荭草苷中、低剂量组高于牡荆苷同等的剂量组,都有显著性差异（P<0.05）,荭草苷和牡荆苷高剂量组相比,无显著性差异。金莲花单体荭草苷和牡荆苷中、低剂量组在降低脑组织中脂褐素含量的活性低于维生素E,具有显著性差异（P<0.05）,荭草苷和牡荆苷高剂量组无显著性差异。7光镜下观察,模型组小鼠海马区神经细胞数量明显减少;细胞排列不整齐;大脑皮层神经细胞可见细胞空泡变性。各治疗组比模型组都有所恢复,其中以荭草苷和牡荆苷高、中剂量组恢复效果明显。电镜下观察小鼠海马区神经细胞发现,模型组出现神经细胞中细胞核模的结构不清和变形,脂褐素的沉积增多,线粒体膜部分损伤,部分内质网扩张、肿胀和空泡样变。各治疗组比模型组都有所恢复,核膜有所恢复,其中以荭草苷和牡荆苷高、中剂量组和维生素E恢复效果明显。结果表明:金莲花单体荭草苷和牡荆苷具有改善衰老小鼠一般形态,延缓衰老小鼠脑组织的萎缩;具有提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的活性;提高小鼠肝、脑、肾组织中SOD、CAT、GSH-PX、Na+-K+-ATP、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性和降低MDA的含量的活性;具有降低小鼠脑组织中脂褐素的含量以及改善衰老小鼠海马区神经细胞结构的功能。可见金莲花单体荭草苷和牡荆苷具有显著的延缓衰老的作用,其作用的发挥是通过多途径、多环节、多靶点的整体调节机制。其中,中、低剂量组荭草苷的抗氧化作用优于牡荆苷,荭草苷和牡荆苷的高剂量组与维生素E作用相当。