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仿刺参中多糖活性成分研究

2020-12-14阅读(699)

仿刺参中多糖活性成分研究

论文摘要

仿刺参（Apostichopus japonicus Selenka）属于棘皮动物门（Echinodermata）、海参纲（Holothuroidea）、楯手目（Aspidochiroia）、刺参科（Stichopodidae）、仿刺参属（Apostichopus）的海洋动物。广泛生长在我国北方海域,是一种及其著名的营养保健食品,具有重要的经济价值。本课题对辽宁省大连海域的仿刺参（A. japonicus Selenka）中的多糖进行了系统的化学和生物活性研究。采取水提取法进行提取,用膜分离技术和乙醇沉淀法纯化,Sevage法去除蛋白,双氧水脱色制备得仿刺参粗多糖。以仿刺参冻干粉为原料提取仿刺参粗多糖的得率均值为8.55%。应用超滤装置,DEAE-纤维素柱层析,Sephadex G-100柱层析,高效凝胶过滤色谱（HPGFC）等多种分离技术对仿刺参粗多糖进行分离纯化得到以下均一多糖组分,AJP-1 （得率为5.840%）、AJP-2 （得率为6.480%）、AJP-3 （得率为6.816%）、AJP-4 （得率为6.344%）、AJP-5 （得率为8.768%）。上述多糖组分经紫外扫描不含蛋白质和氨基酸,经HPGFC检测均一性较好。各仿刺参多糖组分样品为乳白色絮状粉末,易溶于水和二甲基亚砜,不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂,硫酸-苯酚反应和Molish反应均为阳性。AJP-1:相对分子量为101 291 Da,糖醛酸的含量是样品中最高的,含量为1.1170%。AJP-2:相对分子量为73 010 Da,糖醛酸含量为0.4202%。AJP-3:相对分子量为39 638 Da,糖醛酸含量为0.5046%。AJP-4:相对分子量为9 716 Da,糖醛酸含量较低,无法检测出具体的质量百分比。AJP-5:相对分子量为2 213 Da,样品未检测出糖醛酸。所得各个仿刺参多糖组分中糖组成有一定的差异,除AJP-5不含岩藻糖和糖醛酸外,其余都含有岩藻糖、葡萄糖、氨基糖和糖醛酸。组成成分相同的多糖它们的单糖的含量比例也不同,而且糖苷键类型也有差异。仿刺参多糖样品基本上均含有羟基、羧基、乙酰胺基、硫酸酯基以及岩藻糖的甲基,且不同海参多糖硫酸酯基的取代位点略有差异。所得多糖样品均为α构型。除AJP-5外,其余多糖样品都主要含有C-2,4位的双硫酸酯基取代,而且大部分都同时含有C-3,4位的双硫酸酯基取代、C-4位的单硫酸酯基取代以及未被硫酸酯化的岩藻糖。仿刺参多糖样品的抗凝血活性实验显示,多糖样品浓度在一定剂量下显著延长凝血酶时间（TT）。AJP-1的相对分子量大于10万,抗凝血效果最好;AJP-2与AJP-3相对分子量在3-8万之间,抗凝效果次之;而AJP-4相对分子量在1万左右,抗凝效果不明显。相对分子量大的仿刺参多糖抗凝效果强于相对分子量小的仿刺参多糖,可能与多糖含有的硫酸酯基、糖醛酸、氨基糖、岩藻糖等的含量与取代情况以及糖链结构有关;相对分子量1万以下的仿刺参多糖抗凝效果不佳,这可能是由于多糖硫酸酯基、糖醛酸、岩藻糖含量太低的缘故。仿刺参多糖的PTPσ抑制试验显示,对PTPσ酶具有显著的抑制活性,在20μg/ml的浓度下,抑制率为99.8%,表明仿刺参多糖具有良好的神经保护的作用,值得进一步研究,可应用于改善神经功能或防治老年痴呆症药物及保健功能食品的研究开发。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 引言
  • 1 课题概述
  • 1.1 仿刺参及其多糖活性概述
  • 1.2 立题依据
  • 1.3 课题的实验设计
  • 2 实验部分
  • 2.1 仿刺参多糖的提取分离与纯化
  • 2.1.1 实验材料、仪器和试剂
  • 2.1.2 实验方法
  • 2.2 仿刺参多糖的理化性质测定
  • 2.2.1 纸层析检验纯度
  • 2.2.2 HPGFC 检验纯度
  • 2.2.3 仿刺参多糖相对分子量的测定
  • 2.2.4 仿刺参多糖中糖醛酸的测定——硫酸咔唑法
  • 2.2.5 仿刺参多糖的水解及其产物的硅胶薄层色谱
  • 2.2.6 仿刺参多糖酸水解产物组分进行 GC-MS 法分析
  • 2.2.7 仿刺参多糖的紫外光谱、红外光谱分析
  • 2.2.8 仿刺参多糖的核磁共振波谱
  • 2.3 仿刺参多糖的生理活性测定
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 仿刺参多糖的提取分离与纯化结果
  • 3.2 仿刺参多糖相对分子量测定结果
  • 3.3 仿刺参多糖中糖醛酸的测定结果
  • 3.4 仿刺参多糖的水解产物的硅胶薄层色谱结果
  • 3.5 仿刺参多糖酸水解产物 GC-MS 法分析结果
  • 3.6 仿刺参多糖的紫外光谱、红外光谱分析结果
  • 3.6.1 紫外光谱结果
  • 3.6.2 红外光谱结果
  • 3.7 仿刺参多糖的核磁共振波谱分析结果
  • 3.8 仿刺参多糖的生理活性测定结果
  • 3.9 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 在读期间公开发表论文（著）及科研情况

    • 相关论文文献

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