多药耐药基因MDR1/MRP反义寡核苷酸逆转舌癌细胞放疗耐药性的研究

论文摘要

目的:⑴建立舌癌细胞耐放疗株。⑵研究反义硫代磷酸寡核苷酸（antisenseoligonucleotides ,ANOS）抑制人舌癌细胞耐放疗株多药耐药基因（multidrugresistance gene 1 , MDR1） 及多药耐药相关蛋白基因（ multidrugresistance-associated protein gene, MRP）基因以及蛋白表达的作用。⑶评价MDR1/MRP 反义寡核苷酸逆转人舌癌耐放疗细胞株耐药性的效能。⑷研究ANOS 和脂质体Lipofectamine 对人舌癌细胞株的毒性作用。方法:⑴利用舌癌细胞株Tca8113 建立耐放疗舌癌细胞株,免疫组化方法法检测细胞MRP 蛋白P190及MDR1 蛋白P-gp 的表达。⑵用人工合成互补于MRP 及MDR 基因mRNA 特定片断的ANOS,ANOS 剂量分别是0.1、0.25、0.5μmol/L。以正义ANOS 作为实验对照,以脂质体Lipofectamine 为载体转染耐放疗的Tca8113 细胞株,并与未转染的耐放疗组比较。⑶MTT 法检测反义正义ANOS 和Lipofectamine 的细胞毒性。⑷用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）测定转染后MRP 及MDR1 mRNA 表达,流式细胞技术（FCM）测定细胞膜P190和P-gp 表达。结果:⑴建立的细胞株耐放疗总剂量为20Gy,免疫组化方法结果显示耐放疗细胞中P190和P-gp 呈现高表达。⑵RT-PCR 结果显示:转染mRNA 表达的降低与ANOS的作用时间和浓度有关,转染后12小时开始出现MRP及MDR1mRNA 表达较转染前为低,转染24 小时后,各剂量组与对照组比较MRP 及MDR1 mRNA 的表达均降至最低（P<0.05）,在转染后48 小时后,各组MDR1mRNA 和MRP mRNA 水平基本恢复到转染前的水平,提示ANOS 转染后24小时MDR1 mRNA 和MRP mRNA 的表达到最低。在各剂量组之间的比较中,0.5μmol/L 浓度组在转染后12 小时和24 小时均低于对照组和其他浓度组（P<0.05）,提示ANOS 浓度在0.5μmol/L 时对MRP 及MDR1 mRNA 的表达抑制作用最强。流式细胞技术（FCM）显示:转染后细胞中P190和P-gp 表达较转染前为低,降低的程度与作用的时间和浓度有关,与其他浓度组和对照组比

论文目录

• 一、论文
• 1 、中文摘要
• 2 、英文摘要
• 3 、前言
• 4 、材料和方法
• 5 、结果
• 6、讨论
• 7 、小结
• 8 、参考文献
• 二、综述
• 1 、摘要
• 2 、正文
• 3 、参考文献
• 三、致谢