导读:本文包含了输卵管特异表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人血清白蛋白,鹌鹑,输卵管特异性表达载体,细胞表达
输卵管特异表达载体论文文献综述
王晶[1]（2009）在《人血清白蛋白鹌鹑输卵管特异表达载体的构建及其表达》一文中研究指出人血清白蛋白(humanserumalbumin,HAS)是人血浆中最丰富的蛋白质,在人体内起着维持血液渗透压、运输、营养等作用。因而在国内外都有很大的市场需求。禽类输卵管生物反应器是基因制药的新方法,其生产药用蛋白具有安全、高效、成本低廉等优点,因此,通过制备禽类输卵管生物反应器生产人血清白蛋白将具有美好的前景。禽类生物反应器的研究,主要在于能构建在禽类体内能有效调控外源基因表达的特异表达载体。其中上游载体的构建首要条件,实现外源基因在鹌鹑输卵管组织中的特异性表达必须有组织特性型的启动子的参与。本试验以鹌鹑卵清蛋白5’调控区为调控序列,来启动人血清白蛋白HAS的表达,构建了含有新霉素抗性基因、绿色荧光蛋白报告基因的人血清白蛋白输卵管特异性表达载体,为下一步通过体细胞核移植法制备输卵管生物反应器生产人血清白蛋白打下坚实的基础。本实验主要从以下几个方面进行了研究,其结果如下:1.人血清白蛋白基因的克隆RT-PCR技术成功地扩增,克隆了含人血清白蛋白序列长约1.8kb的片段,经电泳初步鉴定为目的基因后,产物纯化后连至pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5a。.筛选阳性克隆菌,酶切鉴定并进行序列分析酶切鉴定并进行测序,结果与GeneBank中登录的人的血清白蛋白cDNA序列的同源性为97%,有个别碱基发生突变,突变并没有引起最大读码框的改变,即成功的克隆了HSA的cDNA序列。2人血清白蛋白鹌鹑输卵管特异表达载体的构建(1)以鹌鹑卵清蛋白5’调控区POV来启动HAS的表达。重新设计HSAcDNA引物,分别在上下游引物5’端添加含有限制性内切酶kpnⅠ和HindⅢ酶切位点,重新扩增了HAScDNA序列。用限制性内切酶kpnⅠ和HindⅢ双酶切质粒pOV和pHSA,然后用T4连接酶定向连接成重组质粒pOV-pHSA,经酶切鉴定,两者成功融合。(2)采用双酶切定向克隆的方法,利用真核表达载体pIRES2-EGFP构建了含有抗性基因、报告基因的人血清白蛋白非融合型输卵管表达载体pEGFP-VH。用PCR方法和酶切方法检测,表明其中的整个人血清白蛋白输卵管表达构件插入位点准确无误。3人血清白蛋白基因在鹌鹑输卵管上皮细胞和鹌鹑成纤维细胞表达(1)培养了鹌鹑自身的两种细胞:鹌鹑输卵管上皮细胞和鹌鹑胚胎成纤维细胞作为检测平台,将重组后的人血清白蛋白表达载体用脂质体包埋法转染以上两种细胞,通过荧光显微镜观察到报告基因绿色荧光蛋白的表达,结果表明构建的表达载体在成纤维细胞上未见表达;而鹌鹑原代输卵管上皮细胞上有表达.(2)取转染细胞的基因组DNA,设计特异性的检测引物,用PCR法筛选法检测了报告基因表达的阳性细胞克隆, SDS-PAGE银染色法确定鹌鹑输卵管上皮细胞分泌蛋白的分子量,结果显示在转染的鹌鹑输卵管上皮细胞培养上清中含有分子量约为68kDa的HSA。表明构建的表达载体的是有效的,而且表达构件已经初步整合到阳性鹌鹑输卵管上皮细胞的染色体中。(本文来源于《福建农林大学》期刊2009-04-01）
高波,孙怀昌,王永娟,房浩霞,宋成义[2]（2008）在《鸡输卵管特异表达载体的优化及体内表达》一文中研究指出为了实现鸡输卵管特异表达载体在相应组织特异高产表达,并简化质粒DNA的制备过程,本研究在已经构建的鸡输卵管特异表达载体pOV1基础上进行了优化改造,为进一步进行重组药物蛋白的暂态表达及转基因鸡研究奠定基础。首先用限制性内切酶将克隆在pOV1载体的鸡卵清蛋白基因5′-和3′-调控区切出,同时克隆到切除neo基因及CMV启动子的pcDNA3.0载体,构建成另一输卵管特异表达载体pOV2;将鸡卵清蛋白基因5′-调控区单独克隆入同样载体,获得第叁个鸡输卵管特异表达载体pOV3。为了检验叁个输卵管表达载体驱动外源基因在鸡体内输卵管细胞中表达的有效性和特异性,将LacZ报告基因分别克隆入pOV1、pOV2、pOV3中5′-调控区的下游,获得的重组载体pOV1LacZ、pOV2LacZ和pOV3LacZ经聚乙烯亚胺包裹后,经翅静脉注射产蛋鸡。用RT-PCR和酶活性检测法对LacZ基因在载体注射鸡体内的表达进行检测,结果显示肝、脾、肾、心等组织中无LacZ基因的表达,而输卵管膨大部不仅有LacZ基因的表达,而且表达的重组酶能分泌到蛋清中,雌激素注射对报告基因的表达具有促进作用,其中pOV3LacZ的表达水平较高。这些试验结果表明,鸡输卵管特异表达载体pOV3具有结构相对简单、表达水平较高、组织特异性较好等优点,能用于鸡输卵管生物反应器的研制。(本文来源于《生物工程学报》期刊2008年01期）
徐一,王吉贵,孙绍光,杨淑艳,张鹏[3]（2006）在《人胰岛素基因鸡输卵管特异表达载体的构建及转基因鸡的建立》一文中研究指出利用转基因动物生产功能性蛋白是目前生命科学领域中的研究热点,与哺乳动物乳腺生物反应器相比,鸡输卵管生物反应器具有明显的优点。胰岛素是胰脏中胰岛β细胞分泌的一种蛋白质激素,是维持血糖在正常水平的主要激素之一,也是治疗Ⅰ型糖尿病的首选药物。(本文来源于《全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编》期刊2006-08-01）
高波,宋红芹,李碧春,孙怀昌,王克华[4]（2003）在《鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达》一文中研究指出用高保真PCR法从中国狼山鸡基因组DNA中分别扩增出卵清蛋白基因的5’-和3’-调控区,将扩增产物分别克隆入pGEM-T载体,并进行序列测定,确定与GenBank的鸡卵清蛋白基因相应区域的序列无差异。将上述调控序列插入粘粒载体,构建成鸡输卵管特异表达载体pOV。再将lacZ报告基因克隆在上述载体5’-调控区的下游,获得的重组载体命名为pOVlacZ。经脂质体包裹和翅静脉注射到产蛋鸡体内后,RT-PCR检测表明lacZ基因仅在注射鸡输卵管的膨大部表达,不能在肝、脾、肾、心等组织表达。在上述组织中,仅输卵管膨大部能检测出β-半乳糖苷酶活性(116.7mU/ml),注射雌激素对报告基因的表达具有促进作用(153,3 mU/ml),重组酶能被分泌到鸡蛋的蛋清中(17.33mU/ml)。上述结果表明,本研究克隆的鸡卵清蛋白基因调控区能有效驱动报告基因在输卵管的特异表达,构建的载体能用于鸡输卵管生物反应器的研制。(本文来源于《中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集》期刊2003-11-01）
高波,宋红芹,陈芹,李碧春,孙怀昌[5]（2003）在《鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达》一文中研究指出用高保真PCR法分别从中国狼山鸡基因组DNA中扩增出卵清蛋白基因 (ov)的 5′ 和 3′ 调控区 ,将其克隆入pGEM T载体 ,经序列测定证明与已发表的ov基因相应区域无差异。将上述调控序列插入黏粒载体 ,构建成鸡输卵管特异表达载体pOV。再将lacZ报告基因克隆在上述载体 5′ 调控区的下游 ,获得的重组载体命名为pOVlacZ。用脂质体包裹的pOVlacZ注射产蛋鸡 ,RT PCR检测结果表明lacZ基因仅在注射鸡输卵管的膨大部表达 ,不能在肝、脾、肾、心等组织表达。在上述组织中 ,仅输卵管膨大部能检测出β 半乳糖苷酶活性 ( 1 1 6 7mU ml) ,注射雌激素对报告基因的表达具有促进作用 ( 1 5 3 3mU ml) ,重组酶能被分泌到鸡蛋的蛋清中 ( 1 7 33mU ml)。结果表明 ,克隆的鸡ov基因调控区能有效驱动报告基因在输卵管的特异表达 ,构建的载体能用于鸡输卵管生物反应器的研制。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2003年08期）
赵英会,闫艳春,杜立新,张念华[6]（2003）在《人促红细胞生成素鸡输卵管特异表达载体的构建》一文中研究指出通过PCR技术从产蛋鸡输卵管基因组中扩增出 1 1kb的鸡卵清蛋白 5’端调控区 ,将其亚克隆入pMD18-T载体的多克隆位点 )命名为pOV) ,经酶切和测序鉴定可作为调控序列来启动外源基因的表达。然后从pOV上切下卵清蛋白 5’端调控区 ,再将其亚克隆入pBCE经SalI和HindⅢ双酶切的切口处 ,酶切鉴定为正向插入 ,成功构建了鸡卵清蛋白 5’端调控区调控人促红细胞生成素的质粒表达载体pOV -hEPO ,为制备生产人促红细胞生成素的鸡输卵管生物反应器奠定了基础(本文来源于《生物技术》期刊2003年03期）
赵英会[7]（2002）在《人促红细胞生成素鸡输卵管特异表达载体的构建及其转基因鸡的制备》一文中研究指出随着动物转基因技术的发展，鸡输卵管生物反应器的研究已成为转基因研究的热点之一。本研究在成功克隆了鸡卵清蛋白(OV)基因5'端调控区的基础上，构建了调控hEPO基因的质粒表达载体pOV-B，用脂质体包埋该质粒，然后对供体鸡x期胚盘细胞进行遗传操作，显微注射入同期发育的受体鸡胚盘，采用代用蛋壳法培养，制备出整合了hEPO基因的转基因鸡胚，为制作hEPO的鸡输卵管生物反应器奠定了基础。 提取鸡输卵管组织的基因组DNA，用特异引物PCR扩增出1.1kb卵清蛋白基因5'端调控区，经电泳初步鉴定为目的基因后，连入pMD18-T载体。为进一步鉴定卵清蛋白基因5'端调控区是否具有调控作用，对1.1Kb的卵清蛋白基因5'端调控区进行测序，结果显示转录起始位点、TATA框、上游启动子成分、TATA框样序列、短回文序列以及激素依赖性调控元什都没有发生变化，可以作为调控序列。因此所克隆的卵清蛋白5'瑞调控区可用米启动外源基因的表达。 庄对质粒pBCE鉴定的基础上，陶建pOV-B。用限制性内切酶从质粒pBCE酶切出牛α-S_1-酪蛋白启动子，将卵清蛋白基因5'端调控区与切除了牛α-S_1-酪蛋白启动子的pBCE线性片段相连，转化大肠杆菌DH5α菌株，挑选出阳性克隆，用PCR初步鉴定为阳性后，再用Xba I、Sac I、BamHI进行酶切鉴定。Sac I酶切结果说明两者已经连在一起；BamHI酶切结果说明hEPO基因和卵清蛋白基因5'端调控区部在质粒上；Xba I酶切结果说明卵清蛋白基因5'端调控区止向连接在hEPO基因的上游。从以上鉴定结果看出卵清蛋白基因5'端调控区调控hEPO基因的质粒表达载体pOV-B构建成功。 用脂质体包埋质粒pOV-B，制得脂质体DNA复合物，把该复合物和供体鸡x期胚盘细胞于37℃，融合0.5h，然后显微注射入同期发育的受体胚盘，代用蛋壳法培养。共注射450枚鸡胚，孵化至第3天时，成活率为55.56％；第18天时，成活率为29％；最后的出雏率为4.9％。孵出22只雏鸡中有2只头部有少许黑毛，两只脚呈黑色，从表型看供体细胞已经嵌合入受体。 在孵化过程中，挑选死胚。对1～3日龄死胚，保存全胚；对4～7日龄死胚，两侧性腺大小基本相同，取其两侧性腺保存：对8～21日龄死胚，左侧性腺明显大于右侧，取其左侧性腺保存；对于出雏的活鸡，解剖后，分别取眼、肉、脑、肺、肠、胃、肝、雌性性腺、羽毛囊及血液保存，以备检测。 针对hEPO基因设计其中一段的特异性引物，用PCR检测上述所保存的564个样品，其中3日龄死胚，213个样；4～7日龄死胚，73个样；8～21日龄死胚，48个样：雏鸡22只，220个样。检测阳性结果共95个，其中3日龄死胚，阳性结果89个，阳性率为41.78％；4～7日龄死胚，阳性结果4个，阳性率为5.48％；8～21日龄死胚，阳性结果2个，阳性率为2.25％；雏鸡无一个PCR阳性。PCR阳性都集中在16日龄以前的死胚。 山东农业大学硕士学位论文（2002） 点杂交进一步鉴定，把上述阳性 PCR产物用地高辛标记，X｝4～16日龄的死胚进行点杂交。点杂交阳性有4个：4～7日龄死胚有3个阳性，8～16日龄死胚有1个阳性，点杂交阳性集中在10日龄以前的死胚。 从实验结果可看出hEPO基因己经导入鸡生殖系统，但是否导入鸡的性细胞系还未知。虽然未获得转基因的活鸡，但得到了转基因的早期胚胎，说明用此法制作hEPO的鸡输卵管生物反应器是可行的，需要改进的是进一步提高嵌合入性腺的比率，培养出嵌合入性腺的活鸡。(本文来源于《山东农业大学》期刊2002-05-01）
输卵管特异表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了实现鸡输卵管特异表达载体在相应组织特异高产表达,并简化质粒DNA的制备过程,本研究在已经构建的鸡输卵管特异表达载体pOV1基础上进行了优化改造,为进一步进行重组药物蛋白的暂态表达及转基因鸡研究奠定基础。首先用限制性内切酶将克隆在pOV1载体的鸡卵清蛋白基因5′-和3′-调控区切出,同时克隆到切除neo基因及CMV启动子的pcDNA3.0载体,构建成另一输卵管特异表达载体pOV2;将鸡卵清蛋白基因5′-调控区单独克隆入同样载体,获得第叁个鸡输卵管特异表达载体pOV3。为了检验叁个输卵管表达载体驱动外源基因在鸡体内输卵管细胞中表达的有效性和特异性,将LacZ报告基因分别克隆入pOV1、pOV2、pOV3中5′-调控区的下游,获得的重组载体pOV1LacZ、pOV2LacZ和pOV3LacZ经聚乙烯亚胺包裹后,经翅静脉注射产蛋鸡。用RT-PCR和酶活性检测法对LacZ基因在载体注射鸡体内的表达进行检测,结果显示肝、脾、肾、心等组织中无LacZ基因的表达,而输卵管膨大部不仅有LacZ基因的表达,而且表达的重组酶能分泌到蛋清中,雌激素注射对报告基因的表达具有促进作用,其中pOV3LacZ的表达水平较高。这些试验结果表明,鸡输卵管特异表达载体pOV3具有结构相对简单、表达水平较高、组织特异性较好等优点,能用于鸡输卵管生物反应器的研制。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
输卵管特异表达载体论文参考文献
[1].王晶.人血清白蛋白鹌鹑输卵管特异表达载体的构建及其表达[D].福建农林大学.2009
[2].高波,孙怀昌,王永娟,房浩霞,宋成义.鸡输卵管特异表达载体的优化及体内表达[J].生物工程学报.2008
[3].徐一,王吉贵,孙绍光,杨淑艳,张鹏.人胰岛素基因鸡输卵管特异表达载体的构建及转基因鸡的建立[C].全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编.2006
[4].高波,宋红芹,李碧春,孙怀昌,王克华.鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达[C].中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集.2003
[5].高波,宋红芹,陈芹,李碧春,孙怀昌.鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达[J].中国生物工程杂志.2003
[6].赵英会,闫艳春,杜立新,张念华.人促红细胞生成素鸡输卵管特异表达载体的构建[J].生物技术.2003
[7].赵英会.人促红细胞生成素鸡输卵管特异表达载体的构建及其转基因鸡的制备[D].山东农业大学.2002
标签：人血清白蛋白; 鹌鹑; 输卵管特异性表达载体; 细胞表达;