猪支气管败血波氏杆菌PCR诊断方法的建立及应用

论文摘要

支气管败血波氏杆菌(Bb)是猪传染性萎缩性鼻炎(AR)的主要病原。快速检出Bb,尽早淘汰带菌猪是预防AR发生的重要环节。本研究以支气管败血波氏杆菌flagellin gene的上游序列为背景设计了一对引物fla1和fla2,扩增出大小为237bp目的基因片段,建立了一种快速检测Bb的PCR临床检测方法。经特异性和敏感性试验表明,该方法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和D型多杀性巴氏杆菌均无交叉性反应;最低能够检出112.5pg的模板DNA。 为调查PCR的现场适用性,从延边州采集了48份表现不同临床症状的猪鼻粘液进行检测,结果检出Bb42例,阳性率为87.5%。同时与传统的细菌检查法、微量凝集法进行了比较,结果细菌检查法分离出Bb8例,阳性率仅为16.7%;微量凝集法检出阳性血清24份,阳性率为50%。PCR检测方法中细菌学检查法的5.25倍,是微量凝集法的1.75倍,表明该方法比传统的检测方法更快速、灵敏。 本研究建立的PCR检测方法,操作简便、快速、特异性强、灵敏度高,为AR的快速诊断挺供了技术支持,可用于AR的潜伏期诊斯、早期诊断和流行病学调查等。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 PCR诊断方法的建立
• 1.2.2 对比试验
• 结果
• 2.1 PCR反应结果
• 2.1.1 反应条件优化结果
• 2.1.2 扩增结果
• 2.1.3 灵敏度检测结果
• 2.1.4 特异性检测结果
• 2.1.5 临床检测结果
• 2.2 细菌学与PCR检测结果的比较
• 2.3 微量凝集法与PCR检测结果的比较
• 讨论
• 结论
• 参考文献