乌司他丁对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和MMP-9活性的影响

论文摘要

背景与目的脑梗死是危害人类健康的常见病、多发病,以病死率、致残率和复发率高为特点,给社会、家庭及个人带来了严重的经济与精神负担,因此积极寻找有效的治疗措施成为当前研究重点。为挽救缺血半暗带内损伤较轻的脑组织,及早溶栓重新恢复缺血组织灌注给脑梗死患者带来了希望,但同时也带来了更严重的再灌注损伤问题。目前研究认为血脑屏障（BBB）通透性在脑缺血再灌注损伤的病理生理过程中起重要作用。血脑屏障位于脑实质和其供血血管之间,由毛细血管内皮细胞及其之间的紧密连接、连续的基底膜和基底膜外侧的星形胶质细胞终足构成。血管基底膜由细胞外基质分子（ECM）组成,对维持BBB的完整性起重要作用,而ECM正是基质金属蛋白酶（MMPs）的主要作用底物。近年来研究发现脑缺血及再灌注后出现MMPs表达增加,尤其是MMP-9与血脑屏障通透性的增加有关。MMP-9基因敲除可减小鼠缺血后的脑梗死体积；MMP-9可降解ECM,导致BBB受损引起出血和水肿,并能促进中性粒细胞浸润,引起局部炎症反应,加重组织损伤。因此寻找以MMP-9为作用靶点,减轻血脑屏障通透性进而减轻脑损伤的神经保护剂意义重大。乌司他丁是一种蛋白酶抑制剂,已有许多研究证实乌司他丁对肝、肾、心、肠、肺等组织缺血再灌注损伤有器官保护作用。在脑缺血再灌注损伤方面也有少量研究,多侧重于减轻炎性因子、清除自由基对机体的损伤方面,但对BBB通透性及MMP-9活性的影响方面还不清楚。本实验采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,检测损伤侧脑组织MMP-9活性与BBB通透性的变化,并观察乌司他丁治疗后的效果,探讨乌司他丁对脑缺血的神经保护作用机制,为脑梗死的治疗开辟一条新的途径。材料与方法健康清洁级SD大鼠72只,体重250g-300g,根据Zea Longa线栓法并加以改进制作大脑中动脉栓塞再灌注损伤模型。将大鼠随机分为三组：假手术组（sham,24只）,缺血再灌注损伤模型组（MCAO/R,24只）和乌司他丁处理组（UTI,24只）,每组均设4个亚组：6h、24h、48h、72h,每个亚组6只大鼠。将乌司他丁溶于生理盐水中制成溶液,治疗组于再灌注后5min内给予腹腔注射乌司他丁（10000U/kg）一次,以后每天一次。假手术组和模型组给予相应体积生理盐水（1ml/kg）。在各时间点处死前半小时给予舌下静脉注射2%伊文思蓝（2%EB,2ml/kg）,30min后相应时间点处死大鼠。通过测定损伤侧脑组织中EB渗出量来观察BBB通透性的改变,用明胶酶谱法检测同侧脑部MMP-9活性变化。所有数据均以均数±标准差（x±s）表示,采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。多组数据比较采用单因素方差（One-Way ANOVA）分析,组间比较采用Bonferroni法,p<0.05有统计学差异。结果1 EB渗出量：大鼠舌下静脉注射伊文思蓝后,可见大鼠全身迅速变蓝。通过检测损伤侧脑组织伊文思蓝渗出量,结果表明缺血再灌注组伊文思蓝渗出量在24h达高峰。乌司他丁处理后EB渗出量明显降低,结果有统计学意义（p<0.05）。2 MMP-9活性表达：假手术组脑内MMP-9的活性在各时间点表达均较低；缺血再灌注6h后,大鼠缺血部位脑组织内可见少量MMP-9的表达,24h明显升高,48h达高峰,72h明显下降,与假手术组相比有显著性差异（p<0.05）。乌司他丁处理后脑内MMP-9的表达在6h、24h和48h组升高幅度均较模型组相同时间点为低,结果有统计学意义（p<0.05）。结论1、大鼠脑缺血-再灌注后EB渗出量、MMP-9活性表达明显升高,且呈动态变化。说明BBB通透性、MMP-9参与脑缺血再灌注损伤。2、乌司他丁可能通过降低MMP-9的活性表达,从而减轻血脑屏障通透性的破坏,这可能是乌司他丁在脑缺血再灌注损伤的脑保护作用机制之一

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述部分 乌司他丁对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究进展
• 参考文献
• 附录部分
• 缩略词
• 个人简历
• 在学期间发表的学位论文
• 致谢