栗疫病菌群体遗传多样性及其营养体不亲和性引起的程序性细胞死亡

论文摘要

本研究就中、日、意、美等四国的栗疫病菌群体进行ISSR遗传多样性分析;此外,还对栗疫病菌营养体不亲和性引起的程序性细胞死亡(PCD)做了部分的形态学研究。利用ISSR分子生物学技术对来自于山东、北京、江西、安徽、福建、江苏、辽宁、浙江、日本、意大利和美国等地11个栗疫病菌群体群体遗传多样性和遗传分化进行分析。结果表明:由53个ISSR引物中筛选出11个引物来对以上四个国家的栗疫病菌11个群体共220个菌株进行扩增,共检测到177个位点,其中多态位点为174个,多态位点百分率(P)为98.31%。比较表明中、日、意、美栗疫病菌群体水平具有较高的遗传多样性。利用算术加权平均数法(UPGMA)对栗疫病菌11个群体进行聚类,结果可分为3大类群。采用DAPI染色剂对配对培养的菌株进行染色,并用荧光显微镜辅助观察菌丝在营养体亲和与不亲和情况下菌丝融合后细胞核及细胞质等发生一系列的变化过程。实验结果发现:(1)营养体亲和性菌株在融合的一系列变化过程中,其细胞核发生融合后又恢复正常,而菌丝并没有其它任何明显的变化。(2)营养体不亲和性菌株在融合后的一系列变化过程中,早期的细胞核并没有明显的变化,而其菌丝内却出现了液泡化、细胞质浓缩现象;中期的细胞核已有部分的核发生了消解,出现弥散的、云雾状的细胞残核,细胞明显液泡化、细胞质浓缩,也有部分菌丝发生明显的细胞内含物的瓦解;晚期的细胞核已完全消解,可能会留有部分云雾状的细胞残核,菌丝会发生严重的畸形、部分或全部的消解。运用扫描电子显微镜对配对培养的菌株融合过程进行显微观察。实验结果发现:营养体亲和性菌株在融合时,接合处的菌丝没有发生明显的变化,菌丝依然正常生长。营养体不亲和性菌株在融合时,接合处的菌丝会发生菌丝皱缩,甚至死亡等一系列不正常的现象。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 上篇 文献综述
• 第一章 疫病菌群体遗传多样性
• 1 遗传多样性的研究
• 1.1 遗传多样性的概述
• 1.1.1 遗传多样性概念
• 1.1.2 遗传多样性的本质
• 1.1.3 遗传多样性的层次
• 1.1.4 遗传多样性的研究意义
• 1.2 遗传多样性产生的基础
• 1.2.1 遗传突变
• 1.2.2 重组
• 1.3 种群遗传结构
• 1.3.1 种群和基因库
• 1.3.2 基因和基因型频率
• 1.3.3 哈代—温伯格（Hardy-Weinberg）平衡
• 1.4 遗传多样性研究的分子生物学技术
• 1.4.1 同工酶电泳（isozyme electrophoresis）
• 1.4.2 限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism）
• 1.4.3 随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphism DNA）
• 1.4.4 扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism）
• 1.4.5 简单重复序列多态性（simple sequence repeat）
• 1.4.6 简单重复序列间多态性（inter simple sequence repeat）
• 2 栗疫病菌遗传多样性的研究进展
• 2.1 营养体亲和性
• 2.2 同工酶、全蛋白电泳
• 2.3 DNA分子技术
• 第二章 疫病菌营养体不亲和性引起的细胞程序性死亡
• 1 栗疫病菌营养体不亲和性的概述
• 2 细胞程序性死亡的概述
• 2.1 细胞程序性死亡的概念及起源
• 2.2 细胞程序性死亡调控机理
• 2.3 细胞在PCD过程中的形态和生化特征
• 2.4 真菌PCD的检测方法
• 2.4.1 形态学检测
• 2.4.1.1 光学显微镜观察
• 2.4.1.2 荧光显微镜观察
• 2.4.1.3 电子显微镜观察
• 2.4.2 生物化学检测
• 2.4.3 分子生物学检测
• 2.4.4 流式细胞仪定量分析
• 2.4.5 其它检测方法
• 2.4.5.1 磷脂酰丝氨酸外翻分析联合联合PI法（Annexin Ⅴ-PI）
• 2.4.5.2 蛋白酶活性检测
• 2.4.5.3 其他
• 2.4.6 综合运用各种检测方法
• 参考文献
• 下篇 研究内容
• 第一章 栗疫病菌群体遗传多样性
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 供试菌株
• 1.1.2 培养基
• 1.1.2.1 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
• 1.1.2.2 马铃薯葡萄糖培养液（PDB）
• 1.2 研究方法
• 1.2.1 菌丝收集
• 1.2.2 基因组DNA的提取
• 1.2.2.1 试剂配制
• 1.2.2.2 DNA提取方法
• 1.2.2.3 DNA质量与浓度检测
• 1.3 ISSR分析
• 1.3.1 引物设计
• 1.3.2 ISSR-PCR反应体系
• 1.3.3 ISSR-PCR反应程序
• 1.4 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 引物筛选
• 2.2 扩增结果
• 2.3 群体内遗传多样性分析
• 2.4 群体间遗传分化
• 2.5 群体间遗传距离
• 2.6 群体间遗传多样性
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二章 疫病菌营养体不亲和性引起的程序性细胞死亡
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 供试菌株
• 1.1.2 培养基
• 1.1.2.1 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
• 1.1.2.2 半合成培养液
• 1.1.2.3 EP完全培养液
• 1.1.2.4 水琼脂培养基（1%）
• 1.1.3 试剂配制
• 1.1.3.1 磷酸钠缓冲液（Gomor:缓冲液）（pH 6.8）
• 1.1.3.2 戊二醛固定液（2.5%）
• 1.1.4 试验仪器
• 1.2 研究方法
• 1.2.1 检测营养体亲和性
• 1.2.2 菌株的配对培养和观测
• 1.2.3 扫描电镜菌株的培养
• 1.2.4 玻片的制备
• 1.2.4.1 显微镜玻片的制备
• 1.2.4.2 扫描电镜玻片的制备
• 1.2.5 显微镜观察菌丝融合过程
• 1.2.6 扫描电镜观察菌丝融合过程
• 2 结果与分析
• 2.1 检测营养体亲和性
• 2.2 菌丝融合过程的显微观察
• 2.2.1 营养体亲和菌株的菌丝融合过程
• 2.2.2 营养体不亲和菌株的菌丝融合过程
• 2.3 扫描电镜观察菌丝融合过程
• 3 讨论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的论文目录
• 致谢