轴突导向因子Slit及其受体Robo在损伤周围神经的表达差异及其功能

论文摘要

Slit为中枢神经系统中线胶质细胞所分泌的一类可扩散的大分子蛋白质，具有排斥发育中的神经生长锥，诱导细胞迁移，促进轴突生长与分支形成的作用。Robo属于细胞粘附分子（cell adhesionmolecules，CAMs）免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）超家族成员，为跨膜受体蛋白，介导Slit对生长锥和神经元的排斥作用，参与调控发育中的中枢神经轴突定向，同时Robo也具有同亲和附着与异亲和附着特性，可促进轴突生长和调控神经纤维束化、定位。有关Slit及Robo在成年动物周围神经系统中的分布与功能报道极少。同时，周围神经再生特异性（再生轴突生长定向）的细胞与分子机制尚不明确。 目的：研究Slit、Robo基因和蛋白质在成年大鼠脊髓、脊神经节（dorsal root ganglian，DRG）、坐骨神经（sciatic nerve，SN）的表达差异及损伤后的变化，探讨它们在神经损伤再生过程中的作用，揭示Slit、Robo的生理功能和周围神经再生特异的分子机制。 材料与方法：SD大鼠坐骨神经切断或脊神经后根切断后，存活3、7、14、21、28 d，取其相应节段脊髓、后根、DRG和损伤神经的远、近端；利用RT-PCR、原位杂交、免疫组织化学等方法检测Slit1、Slit2、Robo1、Robo2在上述组织中的表达。进而利用坐骨神经压榨（sciatic nerve crush，SNC）和切断后立即缝合（end to end suturetransected sciatic nerve，SNS）模型，将可溶性Robo1-Fc融合蛋白注入到损伤或缝合部位，形成坐骨神经压榨实验组（SNCE）和坐骨神

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• 缩略词
• 正文
• 前言
• 第一章 Slit和Robo在正常成年大鼠脊髓、脊神经节（DRG）和坐骨神经的表达
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 灌注取材
• 1.1.3 DRG半定量RT-PCR
• 1.1.4 原位杂交
• 1.1.5 免疫组织化学
• 1.1.6 结果观察与数据收集处理
• 1.2 结果
• 1.2.1 Robo和Slit在正常成年大鼠脊髓的表达
• 1.2.2 Slit和Robo在正常成年大鼠脊神经节（DRG）的表达
• 1.2.3 Slit在正常成年大鼠坐骨神经的表达
• 1.3 讨论
• 1.3.1 Slit和Rob在成体大鼠脊髓、DRG及坐骨神经呈差异表达
• 1.3.2 Slit和Robo在成体动物中的可能作用
• 1.4 小结
• 第二章 周围突和中枢突损伤后Slit和Robo在正常成年大鼠脊神经节（DRG）和神经干的表达的变化
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 动物模型
• 2.1.2 原位杂交、免疫组织化学及荧光免疫组织化学、数据处理及统计分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 Robo在DRG内的表达变化
• 2.2.2 Slit在DRG内的表达变化
• 2.2.3 Slit1在损伤坐骨神经的表达
• 2.3 讨论
• 2.3.1 Robo和Slit参与了感觉轴突再生的调控
• 2.3.2 Robo和Slit参与调控再生感觉再生调控的可能分子机制
• 2.4 小结
• 第三章 Robo1对周围神经再生的影响研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 动物模型
• 3.1.2 甲苯胺兰染色与有髓轴突计数
• 3.1.3 坐骨神经功能指数（the sciatic function index,SFI）测定
• 3.2 结果
• 3.2.1 再生轴突计数
• 3.2.2 再生神经束膜形成及束膜外再生纤维观察
• 3.2.3 步态分析和坐骨神经功能指数（SFI）分析
• 3.3 讨论
• 3.3.1 关于Robo-Fc对Robo功能的中和作用
• 3.3.2 Robo1能促进损伤周围神经早期再生和生长锥导向
• 3.4 小结
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 在读博士期间发表的学术论文及科研成果
• 致谢