Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡及荔枝核总皂苷的干预

论文摘要

目的：研究荔枝核总皂苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用,并初步探讨其机制。方法：Hoechst33342/PI荧光双染,荧光显微镜观察PC12细胞凋亡情况,并计算凋亡率；原位缺口末端标记（TUNEL）,光镜观察PC12细胞凋亡情况,计算凋亡指数；AnnexinV-PI双染,流式细胞仪检测凋亡细胞,计算凋亡率；罗丹明123标记,荧光显微镜观察线粒体膜电位（Aψm）改变；RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳法检测PC12细胞NF-κB P65 mRNA的表达,结果:（1）PCI2细胞凋亡情况：①Hoechst33342/PI荧光双染法：荧光显微镜下,与对照组比较,模型组细胞具有明显凋亡细胞特征（胞核浓染成亮蓝色或呈颗粒状荧光团块,有的可见分叶、.碎裂状及边集现象）,凋亡细胞明显增多及凋亡率明显升高（P<0.05）,且还可见大量死亡细胞（染为红色）；与模型组比较,0.938～7.500mg·L-1荔枝核总皂苷干预组凋亡细胞、死亡细胞明显减少,凋亡率明显降低（P<0.05）。②TUNEL法：光镜下,与空白对照组比较,模型组细胞存在明显凋亡细胞特征（核固缩,胞核致密,深染为棕黄色）,凋亡细胞数量及凋亡指数明显增多（P<0.01）；与模型组比较,0.938～7.500mg·L-1荔枝核总皂苷预处理组细胞具有凋亡细胞特征的细胞数量明显减少,凋亡指数明显降低（P<0.01）。③流式细胞仪检测：散点图上,对照组细胞主要集中在左下象限,右边的象限几乎没有凋亡细胞；模型组右下上象限的凋亡细胞及坏死细胞明显增加,细胞凋亡率与对照组比较明显提高（P<0.05）；与模型组比较,0.938-7.500mg·L-1荔枝核总皂苷预处理组右下上象限的凋亡细胞及坏死细胞明显减少,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。（2）线粒体膜电位（Aψm）：荧光显微镜下,对照组存在明显的荧光淬灭,荧光强度弱,即线粒体膜电位耗散量少,模型组细胞荧光强度显著增高,未见有明显荧光淬灭,即线粒体膜电位耗散量显著增高。荔枝核总皂苷干预组,细胞荧光减弱,即线粒体膜电位耗散量减少。（3）NF-κBP65mRNA的表达：凝胶电泳图上,各组在141bp处均可见明显的扩增带,为甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDHmRNA）扩增条带,在237bp处有强弱不等但边界清楚的条带为NF-κBP65mRNA的扩增片段。模型组NF-κBP65mRNA扩增片段的亮度较对照组明显增强,与模型组比较0.938-7.500mg·L-1荔枝核总皂苷预处理组NF-κBP65mRNA扩增片段亮度明显减弱。模型组半定量相对灰度值与对照组比较明显增加（P<0.05）；0.938-7.500mg·L-1荔枝核总皂苷干预组相对灰度值与模型组比较明显降低（P<0.05）结论：（1）20μmol·L-1Aβ25-35作用于PC12细胞12h可诱导PC12细胞凋亡；（2）0.938-7.5mg·L-1荔枝核总皂苷均可抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡；（3）荔枝核总皂苷抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的机制：①与荔枝核总皂苷抑制线粒体膜电位下降,改善线粒体功能紊乱有关；②与荔枝核总皂苷抑制Aβ25-35对NF-κB活化,减弱NF-κB触发的凋亡级联反应有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英汉缩略词对照表
• 致谢
• 阿尔茨海默病与神经元凋亡相关性研究现状（综述）
• 参考文献