人参皂苷Rg1对CLP诱导的脓毒血症小鼠免疫调节机制研究

论文摘要

目的1.探讨人参皂苷Rg1（Ginsenoside Rg1，Rg1）对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞体外行为的影响。2.研究人参皂苷Rg1对CLP诱导的脓毒血症模型小鼠的免疫调节作用，并探讨其作用机制。方法1.人参皂苷Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞的影响无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞，制备单细胞悬液，加入不同终浓度的人参皂苷Rg14h后，细菌脂多糖LPS（10μg/mL）作用24h，直径1μm的微球(1×1010/L)结合流式细胞术分析Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响；Griess试剂盒检测NO的释放；H2DCFDA染色检测ROS的含量；Fluo-4/AM染色检测Rg1对Ca2+超载的影响；荧光酶标仪检测，经Sytox Green染色，对放线菌酮、环磷酰胺两种不同凋亡诱导因素引起凋亡的影响。2.人参皂苷Rg1对小鼠淋巴细胞体外形为的影响经过不同浓度人参皂苷Rg1处理后，通过刀豆蛋白A（Con A）刺激诱导淋巴细胞的增殖活化，用DIOC6（3）染色法分析小鼠淋巴细胞活性的影响；用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE）染色法分析淋巴细胞增殖情况；利用流式细胞术（FCM）结合双色免疫荧光染色技术检测CD3+T细胞早、中、晚期活化标志CD69、CD25、CD71表达情况；以碘化丙锭（PI）染色分析细胞周期分布；JC-1染色分析对淋巴细胞线粒体膜电位（ΔΨm）的影响。3.人参皂苷Rg1对CLP诱导的脓毒血症模型小鼠的免疫调节作用通过盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture，CLP）诱导建立小鼠脓毒血症模型。观察一周内人参皂苷Rg1对小鼠生存率的影响；计算经CLP后每组小鼠胸腺之数以及脾脏指数；Griess试剂盒检测小鼠血清NO的释放；体外以刀豆蛋白A（ConA）刺激，CFDA-SE染色分析对CLP小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果1.体外实验研究表明，10、20μmol/L的Rg1时能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞NO和ROS的产生以及吞噬微球的能力；10μmol/L的Rg1能显著抑制Ion诱导的的巨噬细胞Ca2+的超载以及CHX、CTX诱导的细胞的凋亡。2.体外实验研究表明，Rg1能有效促进小鼠淋巴细胞的活性，呈剂量依赖性：CFDA-SE染色结果显示，Rg1能有效促进Con A诱导的T细胞增殖，并呈时间-剂量依赖性；Rg1对ConA刺激的CD3+T细胞CD69、CD25、CD71的表达有促进作用，均呈剂量依赖性；PI染色流式分析结果显示，Rg1促进细胞进入S期和G2/M期；Rg1对ConA诱导的小鼠淋巴细胞线粒体膜电位有明显增强作用。3.体内实验研究表明，Rg1可以延长CLP诱导的脓毒血症模型小鼠的存活时间；Rg1可以有效抑制CLP诱导的脓毒血症模型小鼠NO的释放；Rg1可以有效抑制CLP诱导的脓毒血症模型小鼠胸腺和脾脏的萎缩; Rg1可以在ConA刺激下促进CLP诱导的脓毒血症模型小鼠淋巴细胞的增殖。结论一定浓度的人参皂苷Rg1对小鼠淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞的体外行为均具有显著的调节作用，并经Rg1治疗后对CLP诱导的脓毒血症模型小鼠具有一定的保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 前言
• 一、人参皂苷 Rg1 研究进展
• 1 人参皂苷 Rg1 研究进展
• 2 脓毒血症发病机制研究进展
• 3 脓毒血症对免疫系统的影响
• 4 课题设计思想与意义
• 二、脓毒血症发病机制研究进展
• 三、脓毒血症对免疫系统的影响
• 四、课题设计思想与意义
• 参考文献
• 第一章 人参皂苷 Rg1 对小鼠腹腔巨噬细胞的影响
• 引言
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 参考文献
• 第二章 人参皂苷 Rg1 对小鼠淋巴细胞的影响
• 引言
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 参考文献
• 第三章 人参皂苷 Rg1 对 CLP 诱导的脓毒血症模型小鼠的免疫调节作用
• 引言
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 参考文献
• 全文总结
• 创新点
• 英文缩略词表
• 在学期间发表论文
• 致谢