苏丹红I与柠檬黄单链融合抗体的制备及快速免疫学检测方法研究

论文摘要

苏丹红Ⅰ(SudanⅠ)常用于工业染料,现被一些食品企业作为食品添加剂使用。由于苏丹红Ⅰ食用后在相应酶的作用下,在体内产生致癌物质,对人体具有十分严重的危害,因此,我国及欧盟严禁在食品中添加苏丹红Ⅰ。柠檬黄色素(Tartrazine)是目前我国批准使用的六种食用合成色素之一。人工合成色素是指用人工化学合成方法所制备的有机色素,主要以煤焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成,所以食用合成色素具有一定毒性,我国对在食品中添加合成色素有严格限制。凡是肉类及其加工品,鱼类及其加工品等都不能使用人工合成色素,即使在适用的品种和范围内,使用剂量也有严格规定,决不允许过量使用。在不法利益的驱动下,我国一些食品企业在食品中添加苏丹红Ⅰ和超量添加柠檬黄的现象较为普遍,自2005年以来,已经发生了多起在食品中添加苏丹红Ⅰ、柠檬黄事件,其危害和影响都非常严重,日益引起人们的关注。苏丹红等的危害主要是致癌性,危害效应时间较长,短时间内看不到。目前,对苏丹红Ⅰ常用的检测方法是高效液相色谱法,柠檬黄常用的检测的方法是薄层分析及分光光度计法,但这些方法费时费力,检测主要依靠仪器,很难普及。ELISA方法简便易行,可以弥补其不足,同时,以其单克隆抗体为检测试剂,为苏丹红Ⅰ和柠檬黄的检测提供了便利条件。国内外关于苏丹红Ⅰ、柠檬黄单克隆抗体的相关报道较少。我们依据苏丹红Ⅰ的结构特点,合成苏丹红Ⅰ结构类似物,与载体蛋白偶联,利用杂交瘤技术获得了苏丹红Ⅰ单克隆抗体,依据柠檬黄分子结构特点,利用杂交瘤技术获得了柠檬黄单克隆抗体。利用免疫技术分别组装了两种色素的ELISA快速检测试剂盒。利用胶体金技术,制备了苏丹红Ⅰ的快速检测试纸条。利用生物技术分别获得了两种单克隆抗体的单链抗体,利用基因Linker技术,将两种单链抗体基因连接制备融合基因并表达,表达产物能够同时识别苏丹红Ⅰ、柠檬黄色素,为下一步苏丹红Ⅰ、柠檬黄快速广谱检测研究打下了基础。

论文目录

• 提要
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 综述一 苏丹红Ⅰ检测研究进展
• 1 概况
• 2 理化特征
• 3 毒性
• 4 分析和检测
• 5 结语
• 综述二 柠檬黄色素的研究进展
• 1 概况
• 2 理化特征
• 3 合成及使用
• 4 毒性
• 5 分析和检测
• 6 展望
• 综述三 单克隆抗体技术及应用研究进展
• 1 传统的单克隆抗体制备
• 2 基因工程及新型抗体
• 3 单克隆抗体研究新技术－DNA 免疫
• 4 单克隆抗体在实践中的应用
• 综述四 基因工程抗体研究进展
• 1 基因工程抗体类型
• 2 基因工程抗体库技术
• 3 基因工程抗体的应用
• 第二部分 研究内容
• 实验一 苏丹红Ⅰ完全抗原的制备与分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验二 苏丹红Ⅰ单克隆抗体的制备、纯化及其特性
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验三 苏丹红Ⅰ单克隆抗体ELISA 检测方法的建立
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验四 苏丹红Ⅰ胶体金检测试纸条的研制
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验五 抗苏丹红Ⅰ单链抗体基因的克隆及序列分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验六 抗苏丹红Ⅰ单链抗体基因的表达及活性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验七 柠檬黄色素完全抗原的制备及鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验八 柠檬黄色素单克隆抗体制备、纯化及其特性
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验九 柠檬黄色素单克隆抗体ELISA 检测方法的建立
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验十 SudanⅠ-ScFv、Tar-ScFv 融合基因的克隆、表达及活性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻博期间发表的学术论文及其它成果
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师及作者简介
• CURRICULUM VITAE