斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物活性与致病性研究

论文摘要

近年来，由嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia，Sma）引发的斑点叉尾鮰（Ictalurus Punctatus）的急性、流行性传染病给我国斑点叉尾鮰养殖业造成了严重的影响。该病以体表出现圆形、椭圆形或不规则的褪色斑，腹水、肠炎和肠套叠为病变特征。但目前对该病的致病机理还不清楚，本试验对斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌的胞外产物（extracellular products，ECP）的活性成分和致病性进行了研究，其目的在于搞清Sma ECP的活性，以及ECP对小白鼠和斑点叉尾鮰的致病性和病理损伤作用，从而为阐明该病的致病机理提供理论资料。试验采用平板扩散法对斑点叉尾鮰源Sma ECP活性进行了测定，结果表明该菌ECP具有蛋白酶、脂酶、脲酶、明胶酶活性和溶血毒性，而不具备淀粉酶和卵磷脂酶活性。采用家兔肠袢试验和乳鼠灌胃试验表明Sma ECP具有肠毒性；Sma ECP接种Vero细胞后表现出明显的细胞病变，表明其具有明显的细胞毒性。Sma ECP对小白鼠的致病性试验表明：Sma ECP对小白鼠具有明显的致病性，其LD50为5.37mg／kg。接种小鼠主要表现为呼吸困难，食欲减退，排黄色粘液；肺淤血、出血，肠道扩张、壁变薄，肠腔内充有大量气体和一定的黏液。病理组织学上，肺泡壁毛细血管扩张淤血，肺泡腔内充斥大量红细胞，呼吸上皮肿胀、坏死、脱落；肺支气管上皮脱落；肠粘膜上皮坏死、脱落，固有膜与黏膜下层水肿、大量炎症细胞浸润；肝细胞空泡变性、坏死；脾出血，淋巴细胞数量明显减少。Sma ECP对斑点叉尾鮰的致病性试验表明：Sma ECP对斑点叉尾鮰具有明显的致病性，其LD50为3.21mg／kg。接种鱼主要表现为鳍条基部充血、出血，体表褪色斑，腹部膨大，腹腔内充有大量淡黄色或带血的腹水，胃肠道炎症，肠道套叠，肠腔内充满淡黄色或含血的粘液。病理组织学上表现为肝水肿，狄氏间隙显著增宽，肝细胞轻微空泡变性；脾出血、坏死；肾间质水肿，造血拟淋巴组织坏死，巨噬细胞和淋巴细胞浸润，肾小管上皮颗粒变性甚至坏死，肾小球肿大，毛细血管扩张充血，肾小囊挤压缩小甚至消失；胃肠道粘膜上皮变性、坏死，脱落，固有膜，粘膜下层水肿，炎症细胞浸润；骨骼肌变性、坏死，大量嗜中性白细胞和巨噬细胞浸润。细胞病理学上，病鱼主要器官的细胞均有较为严重的损伤，细胞肿胀，超微结构破坏，特别是细胞核的损伤很明显。细胞核变形、染色质溶解或发生浓缩、裂解边移；线粒体表现为肿胀，嵴断裂，断裂或溶解消失，呈空囊状。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 1. 前言
• 2. 文献综述
• 3. 研究目的和意义
• 4. 试验材料
• 4.1 试验菌株
• 4.2 试验动物
• 4.3 主要培养基
• 4.4 主要试剂
• 4.5 主要仪器
• 5. 试验方法
• 5.1 菌种的复苏和培养
• 5.2 胞外产物的制备
• 5.3 胞外产物蛋白质含量测定
• 5.4 胞外酶活性检测
• 5.5 溶血性检测
• 5.6 肠毒素检测
• 5.7 细胞毒性检测
• 5.8 胞外产物对小鼠的致病性试验
• 5.9 胞外产物对斑点叉尾鮰的致病性试验
• 6. 结果与分析
• 6.1 胞外产物酶活性检测
• 6.2 胞外产物溶血活性
• 6.3 胞外产物肠毒素的检测
• 6.4 细胞毒性
• 6.5 胞外产物总蛋白含量
• 6.6 胞外产物对小鼠的致病性试验
• 6.7 胞外产物对斑点叉尾鮰的致病性试验
• 7. 讨论
• 7.1 胞外产物的酶活性
• 7.2 胞外产物的外毒素特性
• 7.3 胞外产物的致病性
• 8. 结论
• 参考文献
• 致谢
• 图版
• 攻读硕士期间发表文章情况