P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用

论文摘要

目的：翼外肌在错（?）畸形的发展及诊疗的各个阶段中起着重要作用,可以受到外环境改变的刺激而发生适应性改建。本研究在成功构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型的基础上研究P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法：本实验将实验细胞分为对照组和抑制剂组。对每组细胞分别施加0小时,6小时,12小时和24小时的周期性张应力。加力设备采用多通道细胞牵张应力加载系统,加力的力值设定为15%,每分钟10循环,每循环包括3s牵张,3s松弛。应用Hoechst33258和光学显微镜检测细胞凋亡的形态学变化；RT-PCR和流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western Blot检测信号通路中P38MAPK蛋白P-P38MAPK蛋白的表达变化情况。实验结果应用SPSS17.0软件分析处理。结果：光学显微镜可见持续张应力的作用下,骨骼肌成肌细胞发生不同程度的凋亡。Hoechst 33258检测观察到细胞受力后细胞核固缩并出现凋亡小体。RT-PCR和流式细胞术结果显示随加力时间的延长细胞凋亡率增加（P<0.05）,抑制剂SB203580组的凋亡率明显小于对照组,且P38MAPK蛋白和P-P38MAPK蛋白的表达均受明显影响（P<0.05）。结论：1.周期性张应力可以明显诱导细胞凋亡,随加力时间的延长,细胞凋亡率明显增加。2.P38MAPK蛋白、P-P38MAPK蛋白的表达在加力6h降到最低点,之后随加力时间的延长蛋白表达量随之增多。3.加入特异性抑制剂SB203580后细胞的凋亡率明显受到抑制,P38MAPK蛋白、P-P38MAPK蛋白的表达量在加力6h后表达量最低,之后随加力时间的延长蛋白表达量随之增多。4.P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中起到重要的调控作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第1章 成肌细胞的体外培养及力学刺激模型的构建
• 1.1 主要材料与试剂
• 1.2 成肌细胞的体外复苏、培养、传代和冻存
• 1.3 成肌细胞力学刺激模型的构建
• 第2章 P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用
• 2.1 主要材料与试剂
• 2.2 成肌细胞力学刺激模型的建立
• 2.3 光学显微镜观察
• 2.4 Hoechst 33258染色
• 2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
• 2.6 RT-PCR检测细胞凋亡
• 2.7 Western Blot检测蛋白表达情况
• 2.8 抑制剂SB203580的应用
• 2.9 加入抑制剂后成肌细胞细胞凋亡和P38MAPK的检测
• 第3章 实验结果
• 3.1 细胞种板及力学刺激模型构建
• 3.2 细胞加力后形态学改变
• 3.3 Hoechst 33258染色结果
• 3.4 流式细胞术检测细胞凋亡
• 3.5 RT-PCR检测细胞凋亡
• 3.6 Western Blot检测蛋白表达情况
• 第4章 讨论
• 4.1 成肌细胞的体外培养
• 4.2 细胞力学
• 4.3 周期性张应力对翼外肌影响的研究进展
• 4.4 P38MAPK信号通路
• 4.5 P38MAPK信号通路与细胞凋亡的关系
• 4.6 关于本实验
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢