IFN-β基因修饰的人骨髓间充质干细胞抗前列腺癌细胞系PC-3效应的实验研究

论文摘要

目的:观察人类β干扰素（Interferon-beta, IFN-β）基因转染的人骨髓间充质干细胞（Human mesenchymal stem cells, hMSCs）对前列腺癌细胞PC-3生长情况的影响,初步探讨人骨髓间充质干细胞作为基因运载细胞治疗前列腺癌的可行性。方法:应用人前列腺癌细胞株PC-3异种皮下种植建立前列腺癌SCID鼠模型,通过密度梯度离心法分离、培养hMSCs。将体外CM-DiI标记的4～6代hMSCs经尾静脉和肿瘤周围,注射入荷瘤SCID鼠体内,将肿瘤和肝、肺、脾、肾等脏器作冰冻切片和石蜡切片,在荧光显微镜下观察肿瘤及各脏器中hMSCs的分布情况。将已构建的人类β干扰素基因腺病毒表达载体Ad-IFN-β,体外转染人骨髓间充质干细胞。将成功表达β干扰素的IFN-β-hMSCs经尾静脉和肿瘤瘤内注射两种途径将IFN-β-hMSCs注射入小鼠模型体内,观察动物模型中肿瘤大小及生存期,评价IFN-β-hMSCs治疗前列腺癌的实验效果。结果:前列腺癌SCID鼠模型成瘤率91.7%,经病理学证实为均为恶性组织。hMSC经尾静脉注射后,可以向前列腺癌组织趋向和聚集,而在正常组织中未发现hMSC的分布（如,肺脏,肝脏,脾脏,肾脏,肌肉）。经尾静脉和肿瘤原位两种方式途径注射IFN-β-hMSCs都可延长荷瘤鼠的生存期,抑制肿瘤的生长,实验组与各对照组之间比较差异存在统计学意义（P<0.001）。结论:hMSC可以向肿瘤微环境趋向转移,经β干扰素基因修饰的hMSCs体内实验可以有效抑制前列腺癌细胞生长,延长荷瘤鼠的生存期。研究结果可能为前列腺癌的基因靶向治疗提供新的策略。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 试剂及仪器
• 2.2 实验步骤
• 2.2.1 试剂的配制
• 2.2.2 细胞培养
• 2.2.2.1 人前列腺癌细胞株PC-3 的传代培养和收集
• 2.2.2.2 人骨髓间充质干细胞（hMSCs）的分离和培养
• 2.2.3 人骨髓间充质干细胞的鉴定
• 2.2.4 人骨髓间充质干细胞的体外CM-DiI 标记和收集
• 2.2.5 实验动物的饲养
• 2.2.6 SCID 鼠皮下肿瘤模型制备
• 5－IFN-β转染和收集'>2.2.7 人骨髓间充质干细胞的体外AD₅－IFN-β转染和收集
• 5转染和收集'>2.2.8 人骨髓间充质干细胞的体外AD₅转染和收集
• 2.2.9 CM-DiI 标记的人骨髓间充质干细胞注射入荷瘤SCID 鼠
• 5－IFN-β转染的人骨髓间充质干细胞注射入荷瘤SCID 鼠'>2.2.10 AD₅－IFN-β转染的人骨髓间充质干细胞注射入荷瘤SCID 鼠
• 5转染的人骨髓间充质干细胞注射入荷瘤SCID 鼠'>2.2.11 AD₅转染的人骨髓间充质干细胞注射入荷瘤SCID 鼠
• 5-IFN-β注射入荷瘤SCID 鼠'>2.2.12 AD₅-IFN-β注射入荷瘤SCID 鼠
• 5注射入荷瘤SCID 鼠'>2.2.13 AD₅注射入荷瘤SCID 鼠
• 2.2.14 重组人β干扰素皮下注射入荷瘤SCID 鼠
• 2.2.15 人骨髓间充质干细胞在荷瘤SCID 鼠体内分布情况的观察
• 2.2.16 观察注射IFN-β-hMSCs 后对前列腺癌肿瘤生长的影响
• 2.3 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 细胞培养
• 3.1.1 PC-3 体外培养及肿瘤模型的鉴定
• 3.1.2 人骨髓间充质干细胞（hMSCs）的分离培养及鉴定
• 3.2 hMSCs 在荷瘤SCID 鼠体内趋化分布于前列腺癌瘤体
• 3.3 肿瘤原位注射 IFN-β-hMSCs 能抑制前列腺癌肿瘤的生长并且延长荷瘤鼠的生存期
• 3.4 尾静脉注射 IFN-β-hMSCs 能抑制前列腺癌肿瘤的生长并且延长荷瘤鼠的生存期
• 第四章 讨论
• 4.1 前列腺癌基因治疗研究现状
• 4.2 体外研究中IFN-β对人前列腺癌细胞系PC-3 的生物学效应
• 4.3 CM-Dil 标记的hMSCs 在体内向前列腺癌微环境趋向与转移
• 4.4 hMSCs 对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
• 4.5 骨髓间充质干细胞作为基因运载细胞的研究
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 进一步工作的方向
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果