乳化异氟醚对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及凋亡相关基因表达的影响

论文摘要

目的:观察乳化异氟醚（Emulsified isofurane,EI,8 %体积分数）对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞的保护作用,并对其可能的机制进行探讨,为EI以后在临床的研究及应用提供实验依据。方法:利用原代培养的Wister乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分对照组（不加药物处理,常氧条件下培养6h）、模型（H/R）组（不加药物处理,缺氧3h后复氧3h）、脂肪乳组（在培养基中加入脂肪乳干预2h,余同H/R组）和EI组（在培养基中加入EI干预2h,余同H/R组）。各组心肌细胞做相应分组处理后,利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率,并用透射电镜观察细胞超微结构改变;XTT比色法测定细胞存活率;收集心肌细胞行超声粉碎,离心取上清,按照试剂盒说明,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性,硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛（MDA）含量,并测定缺氧复氧后细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因bcl-2 mRNA、bax mRNA的表达;Western blot定量检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:1心肌细胞形态学观察:心肌细胞培养24h出现自发性搏动,72h后聚集成簇,呈现频率为80-100次/min的同步节律性搏动。细胞形态呈梭形或不规则三角形,伪足明显,可发生相互融合,且其超微结构完整、清楚。H/R后心肌细胞皱缩变圆,伪足减少,细胞搏幅减弱、频率减慢甚至出现停搏,超微结构出现线粒体肿胀,内质网空泡等改变。EI和脂肪乳组对H/R心肌细胞的形态和超微结构都有明显改善。2各组心肌细胞存活率比较:与对照组比较,其余各组心肌细胞存活率均降低,差异有统计学意义（P<0.05）;而与H/R组比较,EI组和脂肪乳组心肌细胞存活率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。3各组心肌细胞SOD、LDH活性与MDA含量的比较:与对照组比较,H/R组细胞SOD下降,MDA和LDH升高（均P<0.05）。EI组与H/R组比较,心肌细胞SOD活性提高,MDA和LDH含量降低（均P<0.05）。4 EI和脂肪乳均可显著降低H/R损伤心肌细胞的凋亡率（均P<0.05）,但EI组与脂肪乳组比较降低更明显（均P<0.05）;EI可显著上调Bcl-2表达（P<0.05）、下调Bax表达（P<0.05）;脂肪乳对Bcl-2和Bax表达无影响（P>0.05）。结论:1 H/R对体外培养乳鼠心肌细胞可以造成明显的损伤,表现为细胞存活率降低,心肌酶的漏出,氧自由基的产生增加,心肌细胞超微结构改变,心肌细胞凋亡率增加等。2乳化异氟醚对体外培养乳鼠心肌细胞H/R损伤具有保护作用,表现为能提高细胞存活率,减少心肌酶的漏出,抑制氧自由基产生,维持心肌细胞超微结构完整,抑制心肌细胞凋亡,促进复氧时心肌细胞功能的恢复等。3乳化异氟醚对体外培养乳鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用机制可能与其抗自由基损伤、bcl-2基因表达上调和bax基因表达下调有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 乳化异氟醚对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及凋亡相关基因表达的影响
• 前言
• 第一部分 乳化异氟醚对乳鼠离体心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 乳化异氟醚对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞凋亡及 bcl-2, bax 基因表达的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 结论
• 附图
• 文献综述
• 致谢
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