论文摘要
目的:研究缺血预处理（ischemic preconditioning,IPC）对缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡信号调节激酶-1（apoptosis signal-regulatingkinase 1,ASK1）-丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号转导通路介导的脊髓神经细胞凋亡的影响,并进一步探讨缺血预处理通过调节ASK1和14-3-3的关系从而保护神经细胞的分子生物学机制。方法:健康成年新西兰大白兔随机分为空白组（n=5）、缺血再灌注（ischemia reperfusion,IR）组（n=15）、缺血预处理（ischemicpreconditioning,IPC）组（n=15）,利用左肾动脉以下腹主动脉阻断法制作脊髓缺血预处理模型和脊髓缺血再灌注损伤模型:空白组实验动物仅麻醉后腹腔切开,无其它特殊处理;IR组实验动物夹闭腹主动脉30min后松开腹主动脉分别再灌注至30min、2h、8h,IPC组先予重复三次短暂缺血5min/再灌注5min预处理后夹闭腹主动脉30min,后松开腹主动脉分别再灌注至30min、2h、8h。背部切口取出L4节段以下脊髓组织。HE染色、电镜检测脊髓神经细胞形态学变化;Western-blot检测脊髓组织中ASK1、c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminal kinase,JNK）、p38蛋白的表达与活化;免疫共沉淀（immoprecipitation,IP）检测分析ASK1与14-3-3蛋白间的结合与分离。结果:形态学观察结果显示:IPC组和再灌注相同时段IR组相比脊髓神经细胞凋亡程度、间质出血程度明显减轻。Westernblot结果显示:IPC组和再灌注相同时段IR组相比ASK1、JNK、p38蛋白表达程度无明显变化,但活化程度明显降低。免疫共沉淀结果显示:IPC组和再灌注相同时段IR组相比ASK1和14-3-3蛋白解离程度明显被抑制。结论:缺血预处理可减少缺血再灌注损伤过程中脊髓神经细胞的凋亡,而这种抗凋亡作用可能是通过抑制ASK1和14-3-3蛋白的解离进而抑制ASK1及其下游蛋白JNK、p38的活化而介导的。
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