异源精子遗传物质对雌核发育草鱼基因组的影响分析

论文摘要

用紫外照射遗传失活的异源精子人工诱导成熟草鱼卵子发育,再抑制被激活卵第一次卵裂或者第二极体排出可以得到人工雌核发育草鱼。人工雌核发育技术可加快草鱼纯化过程,是快速经济地建立遗传背景一致纯系的有效方法。然而,在鱼类人工雌核发育中,有关紫外照射遗传失活的异源种精子是否对人工雌核发育鱼有着遗传和发育方面的影响仍然存在争论。为分析外源精子对人工诱导雌核发育草鱼基因组的影响,本研究利用RAPD方法和微卫星技术对14尾二代雌核发育草鱼及其母本一代雌核草鱼和父本鲤鱼的基因组DNA进行了比较分析。本研究的内容和结果如下:1.通过对一代雌核发育草鱼中期分裂相的观察统计结果表明:一代雌核发育草鱼具24对染色体,染色体核型为2N=48=18m+24sm+6st,核型与野生草鱼完全一致,没有发现任何额外的染色体片断。故可以肯定所用的雌核发育一代亲本中没有异源鲤鱼精子染色体片段的存在。2.RAPD分析表明,10条随机引物在二代雌核发育草鱼,母本雌核草鱼和父本鲤鱼中分别检测到104,104,103条扩增带,二代雌核发育草鱼中共扩增出104条片段与母本雌核草鱼相同。单个引物检测到的扩增片段数目在6-13之间,大小在0.2Kb-3Kb之间。10条引物中仅S66在二代雌核发育草鱼,母本雌核草鱼和父本鲤鱼中扩增出1条大小相同的条带,但经过序列分析,它们的核苷酸序列明显不一样,其它9条引物均未扩增出与父本鲤鱼片段大小相同的条带。3.采用微卫星技术对二代雌核发育草鱼及其亲本基因组DNA进行统计分析。结果表明7对鲤鱼微卫星引物在雌核发育草鱼中共扩增出4个微卫星位点,在鲤鱼中检测到22个位点,大小在124-297bp之间。且7对引物在二代雌核发育草鱼和其母本一代雌核草鱼中的扩增条带完全相同,而与鲤鱼的完全不同。4.遗传相似度分析:根据RAPD和微卫星实验数据进行的遗传相似度分析表明二代人工雌核发育草鱼群体与其一代人工诱导雌核发育草鱼母本的遗传相似度从0.9903到1.000,而与父本鲤鱼的遗传相似度为0.000。以上这些实验结果显示在二代雌核发育草鱼、母本雌核草鱼和父本鲤鱼之间没有检测到一致的位点,说明在适当的紫外线处理强度下,鲤鱼精子的遗传物质能够被完全破坏,不会对雌核发育草鱼的基因组造成遗传污染。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1. 引言
• 1.1 鱼类的雌核发育
• 1.2 RAPD分子遗传标记和微卫星DNA方法在鱼类中的应用
• 2. 材料和方法
• 2.1 实验鱼及处理方法
• 2.2 主要实验仪器与耗材
• 2.3 实验试剂
• 2.4 实验方法
• 3. 结果
• 3.1 染色体核型
• 3.2 RAPD扩增结果
• 3.3 微卫星扩增结果
• 3.4 遗传相似度分析
• 4. 讨论
• 4.1 PCR反应条件和引物的筛选
• 4.2 草鱼与鲤鱼基因组DNA存在明显差异
• 4.3 不同实验中异精效应差异的原因分析
• 4.4 二代雌核发育草鱼群体中一些RAPD条带多态性出现的原因
• 参考文献
• 附录
• 致谢